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Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] The bacterial flagellar type III protein export apparatus is composed of a transmembrane export gate complex and a cytoplasmic ATPase complex. The export apparatus requires ATP hydrolysis and the proton motive force across the cytoplasmic membrane to unfold and transport flagellar component proteins for the construction of the bacterial flagellum (Minamino, 2014). The export apparatus is a proton/protein antiporter that couples the proton flow with protein transport through the gate complex (Minamino et al., 2011). A transmembrane export gate protein, FlhA, acts as an energy transducer along with the cytoplasmic ATPase complex (Minamino et al., 2016). To directly measure the proton flow through the FlhA channel that is coupled with the flagellar protein export, we have ...
[摘要] 细菌鞭毛III型蛋白质输出装置由跨膜出口门复合物和胞质ATP酶复合物组成。出口设备需要ATP水解和跨细胞质膜的质子动力来展开和转运鞭毛成分蛋白以构建细菌鞭毛（Minamino，2014）。出口设备是质子/蛋白质反向转运体，其将质子流与通过门络合物的蛋白质转运相结合（Minamino等，2011）。跨膜输出门蛋白FlhA与胞质ATP酶复合物一起作为能量转导（Minamino等，2016）。为了直接测量通过与鞭毛蛋白输出相结合的FlhA通道的质子流，我们开发了具有高空间和pH分辨率的体内pH成像系统（Morimoto等，2016）。在这里，我们描述了我们如何测量生活沙门氏菌细胞出口设备附近的局部pH（Morimoto et al。，2016）。我们的方法可以应用于广泛的活细胞。由于局部pH值是监测活细胞活性的最重要参数之一，因此我们的方案将广泛应用于生命科学的各个领域。
【背景】已经检测到跨膜质子通道复合物的质子通道活性是细菌细胞的细胞质pH降低（Morimoto等，2010; Che等，2014; Furukawa等，2017）。然而，为了详细测量活细胞中膜复合物的质子通道活性，需要精确测量局部细胞质pH。绿色荧光蛋白（GFP）的衍生物，pHluorin，激发波长为410和470 nm，发射于508 nm是测量活细胞胞质pH值的有用探针（Miesenböcket ...
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