| Analysis of Metals in Whole Cells, Thylakoids and Photosynthetic Protein Complexes in Synechocystis sp. PCC6803
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Author:
Date:
2018-06-20
[Abstract] Metals are essential in many biological processes, including oxygenic photosynthesis. Here we described a method to measure the metal pool in whole cells and thylakoids, including the bioactive pool in intact photosynthetic protein complexes in the model oxygenic cyanobacterium Synechocystis PCC6803. In the first part of the protocol, whole cells and thylakoid membranes are carefully prepared, in which the total metal concentrations are measured by inductively coupled plasma triple-quadrupole mass spectrometry (ICP-QQQ-MS). In the second part of the protocol, isolated thylakoids are solubilized to release the integral membrane proteins and the metal binding protein complexes. These intact photosynthetic protein complexes are subjected to size exclusion chromatography (SEC) and ...
[摘要] 金属在许多生物过程中是必不可少的，包括含氧光合作用。 在这里我们描述了测量全细胞和类囊体中金属库的方法，包括模型含氧蓝藻PCH6803中完整光合蛋白复合体中的生物活性库。 在方案的第一部分中，仔细制备全细胞和类囊体膜，其中通过电感耦合等离子体三重四极杆质谱（ICP-MS / MS）测量总金属浓度。 在该方案的第二部分，分离的类囊体被溶解以释放完整的膜蛋白和金属结合蛋白复合物。 将这些完整的光合蛋白复合物进行尺寸排阻色谱（SEC），并通过ICP-MS / MS进行连接分析尺寸分离的复合物中的金属结合。
【背景】氧光合作用的过程需要金属，因为它们在光合电子传递链中作为辅因子和催化剂的基本功能。光合装置需要Fe-S簇，血红素桥Fe和非血红素Fe形式的铁（Fe），可溶性移动电子载体蛋白质质体蓝素中的铜（Cu），叶绿素中的镁（Mg）， ...
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| In vivo Priming of T Cells with in vitro Pulsed Dendritic Cells: Popliteal Lymph Node Assay
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Date:
2017-09-05
[Abstract] One-way mixed lymphocyte reaction (MLR) is a classic tool to measure how T cells react to external stimuli. However, MLR is an in vitro reaction system, which shows different response intensity compared with in vivo trails sometimes due to the lack of cytokines, tissue matrix and other immune response associated factors. The following popliteal lymph node assay (PLNA) protocol is designed to test the T cells antigen-specific reaction in vivo by using ovalbumin (OVA) specific reacted transgenic mouse OT-1 and OT-2.
[摘要] 单向混合淋巴细胞反应（MLR）是测量T细胞如何与外部刺激反应的经典工具。 然而，MLR是体外反应系统，其与体内踪迹相比显示出不同的反应强度，有时由于缺乏细胞因子，组织基质和其他免疫应答相关因素。 设计了以下po淋巴结测定（PLNA）方案，通过使用卵白蛋白（OVA）特异性反应的转基因小鼠OT-1和OT-2，体内测试T细胞抗原特异性反应。
【背景】在移植中，自身免疫和感染研究中，单向混合淋巴细胞反应（MLR）是评估T细胞增殖在抗原存在细胞（APC）或其他外部刺激反应中是否增加或抑制的有用参数。 这是一个典型的功能测试，它展示了T细胞如何受到免疫抑制药物（Hou et al。，2015; Zhang et al。，2015），阴性细胞或外来体疫苗（Ma）的测试试剂的影响 et al。，2016; Cai et al。，2017）。
然而，由于体外免疫反应系统，该系统具有一定的限制。 体内免疫反应受生物微环境的影响，如细胞因子，趋化因子，激素分泌，组织基质等未知生物因子。
在这里，po淋巴结测定（PLNA）被设计为体内工具，通过使用卵白蛋白（OVA）抗原特异性反应系统来测试增加或减少的免疫应答（Bhatt等，2014; Cai et al。，2017）。
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