| FACS-based Isolation of Neural and Glioma Stem Cell Populations from Fresh Human Tissues Utilizing EGF Ligand
|
|
Author:
Date:
2017-12-20
[Abstract] Direct isolation of human neural and glioma stem cells from fresh tissues permits their biological study without prior culture and may capture novel aspects of their molecular phenotype in their native state. Recently, we demonstrated the ability to prospectively isolate stem cell populations from fresh human germinal matrix and glioblastoma samples, exploiting the ability of cells to bind the Epidermal Growth Factor (EGF) ligand in fluorescence-activated cell sorting (FACS). We demonstrated that FACS-isolated EGF-bound neural and glioblastoma populations encompass the sphere-forming colonies in vitro, and are capable of both self-renewal and multilineage differentiation. Here we describe in detail the purification methodology of EGF-bound (i.e., EGFR+) human neural and ...
[摘要] 从新鲜组织中直接分离人类神经和胶质瘤干细胞允许其在没有事先培养的情况下进行生物学研究，并且可以在其天然状态中捕获其分子表型的新方面。最近，我们展示了前瞻性地从新鲜人类生发基质和胶质母细胞瘤样品中分离干细胞群的能力，利用细胞在荧光激活细胞分选（FACS）中结合表皮生长因子（EGF）配体的能力。我们证明FACS分离的EGF结合的神经和成胶质细胞瘤细胞群体在体外包含球体形成的集落，并且能够自我更新和多向分化。在此我们详细描述了具有来自新鲜死亡和手术组织的干细胞特性的EGF-结合（即EGFR +）人类神经和胶质瘤细胞的纯化方法。利用天然配体结合能力前瞻性分离干细胞群的能力为了解非培养条件下的正常和肿瘤细胞生物学打开了新的门，并且适用于在种群和单细胞分辨率下的各种下游分子测序研究。
【背景】由于缺乏通用的神经和神经胶质瘤干细胞标志物（Lathia et al。，2015）以及频繁依赖于培养的细胞，理解人神经和胶质瘤干细胞的内在生物学一直是一个挑战比那些直接从组织分离的。跨膜糖蛋白Prominin或CD133是分离神经（Uchida等，2000）和神经胶质瘤干细胞（GSC）（Singh等，2000）的最好描述和经常使用的干细胞标记物之一。等人，2003; Singh等人，2004; ...
|
|
|
| Isolation of Rodent Brain Vessels
|
|
Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] The prevalence of neurodegenerative diseases is increasing worldwide. Cerebrovascular disorders and/or conditions known to affect brain vasculature, such as diabetes, are well-known risk factors for neurodegenerative diseases. Thus, the evaluation of the brain vasculature is of great importance to better understand the mechanisms underlying brain damage. We established a protocol for the isolation of brain vessels from rodents. This is a simple, non-enzymatic isolation protocol that allows us to perform comparative studies in different animal models of disease, helping understand the impact of several pathological conditions on brain vasculature and how those alterations predispose to neurodegenerative conditions.
[摘要] 全世界神经退行性疾病的发病率正在增加。 已知会影响脑血管系统的脑血管疾病和/或病症，如糖尿病，是神经变性疾病的众所周知的危险因素。 因此，脑血管系统的评估对于更好地了解脑损伤的机制是非常重要的。 我们建立了从啮齿动物分离脑血管的方案。 这是一个简单的非酶分离方案，允许我们在不同的疾病动物模型中进行比较研究，帮助了解几种病理状况对脑血管系统的影响以及这些改变如何易于发生神经退行性疾病。
【背景】大脑高度依赖于通过庞大的血管网络到达的氧气和营养物质的不断供应。主要由微血管内皮细胞组成的血脑屏障（BBB），其包括脑内微血管以及周围结构，包括周细胞，星形胶质细胞和基底膜（Saraiva等，2016; Librizzi等，2017），保证控制稳态环境，保持脑细胞的健康。因此，研究如何干扰脑血管系统完整性的某些病理学是非常重要的。事实上，临床，成像，流行病学和神经病理学研究的有力证据证实了过去二十年来，脑血管疾病的存在在阿尔茨海默病（AD）和其他与衰老有关的痴呆中具有关键作用（Chui et al。，2006; Schneider et al。，2007; Gorelick et al。，2011; Wharton et al。，2011; Yarchoan et al。，2012; Bennett et al。，2013; DeCarli，2013; Toledo et ...
|
|
|