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Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] The CRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeats)-associated protein9 (Cas9) is a simple and efficient tool for genome editing in many organisms including plant and crop species. The sgRNAs of the CRISPR/Cas9 system are typically expressed from RNA polymerase III promoters, such as U6 and U3. In many transformation events, more nucleotides will increase the difficulties in plasmid construction and the risk of wrong integration in genome such as base-pair or fragment missing (Gheysen et al., 1990). And also, in many organisms, Pol III promoters have not been well characterized, and heterologous Pol III promoters often perform poorly (Sun et al., 2015). Thus, we have developed a method using single transcriptional unit (STU) CRISPR-Cas9 system to drive ...
[摘要] 相关蛋白9（Cas9）的CRISPR（聚集的定期交织的短回文重复序列）是许多生物体（包括植物和作物物种）中基因组编辑的简单有效的工具。 CRISPR / Cas9系统的sgRNA通常由RNA聚合酶III启动子（如U6和U3）表达。 在许多转化事件中，更多的核苷酸将增加质粒构建中的困难和基因组错误整合的风险，如碱基对或片段缺失（Gheysen等，1990）。 而且，在许多生物体中，Pol III启动子没有得到很好的表征，异源Pol III启动子通常表现不佳（Sun等，2015）。 因此，我们开发了使用单转录单位（STU）CRISPR-Cas9系统来驱动来自单个RNA聚合酶II启动子的Cas9和sgRNA的表达以在植物中实现有效的基因组编辑的方法。
【背景】CRISPR-Cas9系统的sgRNA主要由小核RNA启动子如U6和U3促进。虽然在许多情况下已经进行了繁殖效率的测试，但也有一些局限性：（1）难以实现Cas9和sgRNA的协调和/或诱导表达; （2）操作多个sgRNA用于多重基因编辑可能是乏味的，需要多个Pol III启动子。传统的RNA聚合酶II启动子不能用于驱动sgRNA表达，通过RNA聚合酶II将多余的核苷酸加入到gRNA的5'和3'末端，并可能中断正常的gRNA功能。另外，由RNA聚合酶II转录的RNA被快速输出到细胞质中，而CRISPR-Cas9 / ...
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