| Generating Three-dimensional Human Granulomas in vitro to Study Mycobacterium tuberculosis-host Interaction
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Author:
Date:
2020-11-20
[Abstract] Granulomas are organized multicellular structures that constitute the hallmark of an infection by the human pathogen Mycobacterium tuberculosis (Mtb). A better understanding of the complex host-Mtb interactions within the granuloma’s environment may lead to new therapeutic or preventive tools to improve the control of the tuberculosis pandemic. To date, several in vitro models that are able to mimic human nascent granulomas have been reported. Here we describe a protocol in which Mtb-infected human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) are embedded within a collagen matrix leading to the formation of three-dimensional micro-granulomas. Subsequently, PBMCs and Mtb can be retrieved allowing multiparametric readouts from both the host and the ...
[摘要] [摘要]肉芽肿是有组织的多细胞结构，构成了人类病原体结核分枝杆菌（Mtb ）感染的标志。对肉芽肿环境中复杂的宿主-Mtb相互作用的更好理解可能会导致新的治疗或预防工具，以改善对结核病大流行的控制。迄今为止，已经报道了几种能够模仿人类新生肉芽肿的体外模型。在这里我们描述一个协议，其中Mtb 被感染的人外周血单核细胞（PBMC）嵌入胶原蛋白基质中，导致形成三维微肉芽肿。随后，可以检索PBMC和Mtb，从而从宿主和病原体中读取多参数。除了并入生理性细胞外基质外，该模型还具有重现休眠样Mtb特征的独特优势，以及在免疫调节治疗下观察到的Mtb复苏的再生，其他已发表的体外实验方法尚未见报道。肉芽肿。
关键词：分枝杆菌，浴池erculosis，肉芽肿，主机，我ñ体外模型，休眠，复苏
[背景]结核病（TB）是一种空气传播的疾病，其包括由人类病原体肺和肺外感染结核分枝杆菌（Mtb的）。结核病在2019年估计造成150万人死亡（世卫组织，2019年），仍然是世界上最致命的传染病。结核病免疫发病机制的特点是形成了组织性的，称为肉芽肿的多细胞簇（Gengenbacher和Kaufmann，2012）。这些结构主要由被感染的和未感染的巨噬细胞的核心组成，周围是淋巴细胞边缘。肉芽肿内的敌对环境推动Mtb进入可能与疾病的潜在形式相关的缓慢或非复制性休眠状态。因此，Mtb休眠导致对针对分枝杆菌复制过程中活跃的代谢途径的抗生素的耐受性增加。 ...
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| Viral Double-Stranded RNA Detection by DNase I and Nuclease S1 digestions in Leishmania parasites
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Author:
Date:
2020-05-05
[Abstract] Many RNA viruses are found in protozoan parasites. They can be responsible for more serious pathology or treatment failure. For the detection of viral double-stranded RNA (dsRNA), sequence-dependent and -independent methods are available, such as quantitative real-time PCR and immunofluorescence, dot blot, ELISA or sequencing. The technique presented here is sequence-independent and is well detailed in the following protocol, taking the example of Leishmania RNA virus (LRV) in Leishmania guyanensis (Lgy) species. To summarise, the protocol is divided into four major steps: RNA extraction from the parasites, RNA purification, enzymatic digestions with DNase I and Nuclease S1, and visualization by gel electrophoresis. This method can be used to detect other viral ...
[摘要] [摘要 ] 原生动物寄生虫中发现了许多RNA病毒，它们可能导致更严重的病理或治疗失败。对于病毒双链RNA（dsRNA）的检测，有序列依赖性和非依赖性方法，例如定量实时PCR和免疫荧光，斑点印迹，ELISA或测序。此处介绍的技术是与序列无关的，并且在以下协议中进行了详细说明，以利什曼原虫（Legymania guyanensis）（Lgy ）中的利什曼原虫RNA病毒（LRV）为例 概括地说，该协议分为四个主要步骤：从寄生虫中提取RNA，RNA纯化，使用DNase I和Nuclease S1进行图解消化以及通过凝胶电泳进行可视化。该方法可用于检测其他病毒dsRNA它提供了一个额外的工具，可以对先前引用的其他技术进行补充，并且很容易实现。
[背景 ] 广泛的多样性RNA病毒中存在的原生动物寄生虫一直都有详细记载（王和王，1991;戈什等人，2011;桑戈等人。2014;碱液等人，2016年Akopyants 等人2016 ; Fernandez- Presas 等人，2017; Grybchuk 。等人。，2018）。此外，这些病毒已经被描述为潜在的毒力因子（Fichorova 等人，2013; EL- Gayar 。等人，2016; 拉特等。，2019）特别值得注意的，存在的内共生体。利什曼原虫RNA病毒（LRV），A ...
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| Macrophage Survival Assay Using High Content Microscopy
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Author:
Date:
2017-08-20
[Abstract] Macrophages maintain tissue homoeostasis by regulating inflammation and tissue repair mechanisms. Thus, the fate of macrophages has an impact on the state of the tissue. The aim of this protocol is to quantify macrophage survival using high content microscopy and image processing software. Here, we describe a high-content image based protocol to assess the effect of diverse stimuli in combination with pharmacological treatments on macrophage survival in a quantitative, unbiased and high-throughput manner.
[摘要] 巨噬细胞通过调节炎症和组织修复机制来维持组织均匀平衡。 因此，巨噬细胞的命运对组织的状态有影响。 该方案的目的是使用高含量显微镜和图像处理软件来量化巨噬细胞存活。 在这里，我们描述了一种基于高含量图像的方案，以定量，无偏差和高通量方式评估不同刺激与药理学治疗对巨噬细胞存活的影响。
【背景】巨噬细胞是吞噬先天免疫细胞，是组织炎症的主要驱动因素（Medzhitov，2008）。 这些细胞与自身免疫，自身炎症，感染性，神经变性和代谢性疾病一起与癌症相关（Ginhoux和Jung，2014）。 在这种情况下，巨噬细胞在炎症中的作用得到了很好的研究，然而，非传染性和感染性疾病中巨噬细胞存活的影响在很大程度上是未知的。 我们的研究表明，某些病原体相关受体（PRR）的激活可以诱导巨噬细胞存活（Eren等，2016）。 我们描述了一种分子机制，证明专门的细胞内病原体如何利用PRR诱导的细胞存活（Eren等，2016）。 因此，需要进一步的研究来了解巨噬细胞存活在不同疾病环境中的作用。
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