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Collagenase from Clostridium histolyticum

Company: Sigma-Aldrich
Catalog#: C2674
Bio-protocol()
Company-protocol()
Other protocol()

Isolation and Separation of Epithelial CD34+ Cancer Stem Cells from Tgfbr2-deficient Squamous Cell Carcinoma
Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract]  Most epithelial tumors have been shown to contain cancer stem cells that are potentially the driving force in tumor progression and metastasis (Kreso and Dick, 2014; Nassar and Blanpain, 2016). To study these cells in depth, cell isolation strategies relying on cell surface markers or fluorescent reporters are essential, and the isolation strategies must preserve their viability. The ability to isolate different populations of cells from the bulk of the tumor will continue to deepen our understanding of the biology of cancer stem cells. Here, we report the strategy combining mechanical tumor dissociation, enzymatic treatment and flow cytometry to isolate a pure population of epithelial cancer stem cells from their native microenvironment. This technique can be useful to further ... [摘要]  大多数上皮肿瘤已经显示含有可能是肿瘤进展和转移的驱动力的癌症干细胞(Kreso和Dick,2014; Nassar和Blanpain,2016)。 为了深入研究这些细胞,依赖于细胞表面标志物或荧光报告基因的细胞分离策略是必不可少的,分离策略必须保持其活力。 从大部分肿瘤中分离不同细胞群的能力将继续加深我们对癌症干细胞生物学的认识。 在这里,我们报告了结合机械肿瘤解离,酶处理和流式细胞术的策略,从其天然微环境中分离出纯种群的上皮癌干细胞。 该技术可用于进一步功能性地分析癌症干细胞(RNA测序和表观遗传学分析),在培养物中培养它们或在移植测定中直接使用它们。
【背景】肿瘤复发和转移是大多数与癌症有关的死亡的主要原因。恶性肿瘤可能由干细胞群体启动和维持(Nassar和Blanpain,2016; Bonnet和Dick,1997),这些细胞是预防复发的重要治疗靶点(Baumann et al。,2008)。研究表明,鳞状细胞癌由肿瘤干细胞亚群维持,其抗药性,并通过进行自我更新和分化(如正常干细胞)引发肿瘤复发,产生增殖祖细胞,其分化形成肿瘤大部分(Locke et al。,2005; Prince et al。,2007; Malanchi et al。,2008; de Sousa e Melo et ...

Isolation and Expansion of Mesenchymal Stem Cells from Murine Adipose Tissue
Author:
Date:
2017-08-20
[Abstract]  Mesenchymal stem cells (MSCs) are currently intensively studied due to significant promise which they represent for successful implementations of future cell therapy clinical protocols. This in turn emphasizes importance of careful preclinical studies of MSC effects in various murine disease models. The appropriate cell preparations with reproducible biological properties are important to minimize variability of results of experimental cell therapies. We describe here a simple protocol for isolation of murine MSCs from adipose tissues and their reproducible multi-log expansion under hypoxia conditions. [摘要]  间充质干细胞(MSC)目前正在深入研究,因为它们代表未来细胞治疗临床方案的成功实施的重大前景。 这又强调了对各种鼠疾病模型中MSC效应的仔细临床前研究的重要性。 具有可重现的生物学性质的合适的细胞制剂对于最小化实验细胞疗法结果的变异性是重要的。 我们在这里描述了一种用于从脂肪组织中分离鼠MSC的简单方案及其在缺氧条件下的可重复的多对数扩增。
【背景】最初由Friedenstein鉴定的MSC是成纤维细胞样形态的骨髓细胞,粘附于塑料和高自我更新能力,导致体外成纤维细胞样集落的形成(Friedenstein等,1976; Review in Phinney andSensebé ,2013)。 MSCs由于其在医学上的潜在应用,目前是研究最成熟的成体祖细胞类型之一。这些细胞可以从各种器官中分离(Murray等,2014),并且被认为是源于血管,以周细胞或血管壁细胞。除了能够沿着成骨,脂肪形成和软骨形成谱系分化的能力之外,MSC具有免疫调节特性,并且被认为参与对组织损伤的反应,以及通过其影响巨噬细胞极化的能力来组织抗炎反应(Prockop,2013; Caplan,2016)。
   鉴于这些特性,MSCs代表了未来相关细胞治疗临床方案的成功实施的巨大前景。这反过来强调了在各种鼠疾病模型中使用MSC进行仔细临床前研究的重要性。制备大量具有可重复生物学特性的合适细胞样品的能力对于在开发基于MSC的实验细胞疗法期间最小化结果的变异性至关重要。然而,与具有强抗氧化防御性并因此在大气氧条件下相当好的人类MSC不同,小鼠MSC对氧应激更敏感,并且在常规CO2培养箱中培养时具有有限的寿命和扩张能力。相反,在缺氧条件下培养这些细胞,相反,显着延长了它们的寿命,并允许多对数扩增,提供足够量的具有可重复性质的细胞材料,用于用鼠实验疾病模型重复实验(Boregowda等,2012; ...

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