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EasyTagTM L-[35S]-Methionine, 500µCi (18.5MBq), Stabilized Aqueous Solution

Company: PerkinElmer
Catalog#: NEG709A500UC
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Assessment of Modulation of Protein Stability Using Pulse-chase Method
Author:
Date:
2017-08-20
[Abstract]  Pulse-chase technique is a method widely used to assess protein or mRNA stability. The principle of pulse-chase relies on labeling proteins or mRNA produced during a short period of time called ‘pulse’ and then following the rate of disappearance of those labeled proteins over a period of time called ‘chase’. This technique thus allows quantitative analysis of modulation of protein or mRNA stability under different treatments or culturing conditions. [摘要]  脉冲追踪技术是广泛用于评估蛋白质或mRNA稳定性的方法。 脉冲追踪的原理依赖于在短时间内产生的称为“脉冲”的蛋白质或mRNA的标记,然后遵循称为“追逐”的时间段内那些标记蛋白质的消失速率。 因此,该技术允许在不同处理或培养条件下对蛋白质或mRNA稳定性的调节进行定量分析。
【背景】脉冲追踪技术是一种方法,其涉及在称为“脉冲”的短时间内在含有标记氨基酸的培养基中培养细胞。这导致结合标记的氨基酸的新合成的多肽的产生。脉冲步骤之后是“追逐”步骤,其中洗涤标记培养基以终止标记过程,并被具有非标记氨基酸的培养基代替,以允许在任何给定时间定量初始合成的放射性标记的蛋白质在这个追逐阶段。因此,该技术可以及时地从合成到降解的方法定量分析感兴趣的蛋白质的加工。脉冲追踪方法可用于分析蛋白质折叠,共翻译修饰和细胞内运输等各种过程(Jansens和Braakman 2003;Magadán,2014)。然而,脉冲追踪技术最常用于评估不同实验条件下蛋白质的稳定性。
   放射性是常用的标签。标签通常用于使用放射性S35甲硫氨酸的蛋白质。放射性标记的蛋白质的消失动力学依赖于这些蛋白质降解的速度,可以用来检验不同实验条件对蛋白质稳定性的影响。为了评估特定目的蛋白质的稳定性,该蛋白质在使用特异性抗体在脉冲期间产生的所有其它免疫标记的蛋白质免疫沉淀。免疫沉淀将分离在脉冲期间产生并且直到免疫沉淀时尚未降解的放射性标记的蛋白质的比例。然后测量放射性以评估标记蛋白质在一段时间内的相对量。 ...

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