| RNA Extraction from Wistar Rat Cochlea for qRT-PCR
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] Otology research has developed considerably in recent years and molecular analysis is crucial to identify metabolic pathways and therapeutic targets. However, the structure of the cochlea limits the amount of cell mass, and special care is required for RNA extraction. Studies applying this technique to the cochlea are scarce in the literature, and difficulties in this area exist. In the context, we describe a method for extracting RNA in Wistar rats for qRT-PCR analyses in order to clarify certain aspects and obtain good quality material.
[摘要] 近年来，耳科学研究发展迅速，分子分析对鉴定代谢途径和治疗靶点至关重要。 然而，耳蜗的结构限制了细胞的数量，特别注意RNA提取。 在耳蜗中使用这种技术的研究在文献中很少，而且在这方面存在困难。 在此背景下，我们描述了提取Wistar大鼠的RNA进行qRT-PCR分析的方法，以澄清某些方面并获得优质的材料。
【背景】了解涉及毛细胞损伤的分子机制对于保持听力非常重要。 来自mRNA的qRT-PCR用于代谢途径和可能的治疗靶标的研究。 耳科学研究通常使用小型啮齿动物，尽管用保存良好的RNA分离感觉细胞样品用于转录分析是一个重大挑战。 用这些动物进行的研究已经提出了在新生儿耳蜗中提取RNA的有效方法，然而，由于少量mRNA的回收，成年耳蜗呈现局限性。 为了评估获得的RNA的质量，可以进行紫外吸收和琼脂糖凝胶电泳。 在此，我们描述了从成年Wistar大鼠获得mRNA的方法，其随后可用于qRT-PCR测定。
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| Myeloid Progenitor Transformation Assay
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] Numerous oncogenes have been identified to cause leukemia. For example, chromosomal translocation generates various fusion genes of the mixed-lineage leukemia (MLL) gene and a partner gene in leukemia, whose gene products transform primary myeloid progenitors into an immortalized state. To characterize the transforming ability of leukemic oncogenes, researchers in the field have developed an ex vivo murine myeloid transformation assay using retroviral gene transduction and its protocol has been improved over the past 10 years. Here, we provide the detailed procedure for this assay.
[摘要] 许多致癌基因已被确定为导致白血病。 例如，染色体易位在白血病中产生混合谱系白血病（MLL ）基因和伴侣基因的各种融合基因，其基因产物将原始骨髓祖细胞转化为永生状态。 为了表征白血病癌基因的转化能力，本领域的研究人员已经利用逆转录病毒基因转导开发了一种离体小鼠骨髓转化试验，其方案在过去的10年中得到了改进。 在这里，我们提供了这个检测的详细程序。
【背景】染色体易位产生多种导致白血病的MLL融合基因（Meyer等人，2017）。野生型混合谱系白血病（MLL）蛋白质起着转录调节剂的作用，其在造血不成熟祖细胞中增强包括同源框（homoxox（Hox））基因在内的一组基因的表达（Jude等。，2007）。在正常造血期间，Hox基因在干/祖细胞部分中表达，但在分化过程中转录下调（Somervaille和Cleary，2006; Yokoyama等人， 2013年）;然而，MLL融合蛋白组成性地上调其靶基因并阻断分化以在离体培养条件下建立永生状态。最近，我们报道了MLL-ENL和MLL-AF10融合蛋白招募AF4以激活转录并且还募集DOT1L复合物以维持相同靶基因的转录以有效地转化造血祖细胞（Okuda等人， ...
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| Isolation and Analysis of Stromal Vascular Cells from Visceral Adipose Tissue
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Author:
Date:
2017-08-20
[Abstract] The obesity epidemic is the underlying driver of the type 2 diabetes mellitus epidemic. A remarkable accumulation of various pro-inflammatory immune cells in adipose tissues is a hallmark of obesity and leads to pathogenesis of tissue inflammation and insulin resistance. Here, we describe a detailed protocol to isolate adipose tissue stromal vascular cells (SVCs), which enrich various immune cells of adipose tissues. These SVCs can be used to examine the population and activation status of immune cells by tracking their cell surface antigens, gene expression, and activation of specific signaling pathways.
[摘要] 肥胖流行是2型糖尿病流行病的根本驱动因素。 脂肪组织中各种促炎免疫细胞的显着积累是肥胖的标志，并导致组织炎症和胰岛素抵抗的发病机制。 在这里，我们描述了分离脂肪组织基质血管细胞（SVCs）的详细方案，其丰富了脂肪组织的各种免疫细胞。 这些SVC可用于通过跟踪其细胞表面抗原，基因表达和特异性信号通路的激活来检查免疫细胞的群体和激活状态。
【背景】过去几十年来，肥胖现在已成为一种流行病，已成为胰岛素抵抗最常见的原因之一。胰岛素抵抗是代谢综合征发病机理的关键病因。代谢综合征的延长状态推动了2型糖尿病（T2DM）的发展（Romeo et al。，2012; Johnson and Olefsky，2013; Saltiel and Olefsky，2017）。
慢性低度组织炎症伴随着增强的免疫细胞浸润，是啮齿动物和人类肥胖症的标志，并且是通过促进炎症状态和中断胰岛素信号传导来促进胰岛素抵抗的发病机制的主要因素（Romeo等2012年; Johnson和Olefsky，2013; Saltiel和Olefsky，2017）。浸润的免疫细胞如促炎性巨噬细胞和B细胞在调节肥胖相关脂肪组织炎症和胰岛素抵抗中起关键作用（Weisberg等，2003; ...
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