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Heraeus Biofuge Stratos (Rotor)

Company: Heraeus Instruments
Catalog#: 3332
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Other protocol()

Extraction of Soluble and Insoluble Protein Fractions from Mouse Brains and Spinal Cords
Author:
Date:
2017-08-05
[Abstract]  The current protocol details the preparation of soluble and insoluble protein lysates from mouse brain or spinal cord samples. In detail, tissue homogenization and sequential protein extraction are described. This procedure yields soluble and insoluble protein extracts that can be further processed in down-stream applications like ELISA or Western blotting. [摘要]  目前的方案详述了从小鼠脑脊髓样品中制备可溶性和不溶性蛋白质裂解物。 详细地描述了组织匀浆和顺序蛋白质提取。 该方法产生可溶性和不溶性蛋白质提取物,其可以在下游应用中进一步加工,如ELISA或Western印迹法。
【背景】这种简单且可重现的脑组织蛋白分离方案详述了总蛋白匀浆物初始分离成可溶性和不溶性级分。 它也可以应用于其他组织样品,并产生含有亲水性蛋白质的可溶性级分和由更疏水的蛋白质组成的不溶性级分。 在不含洗涤剂的裂解缓冲液中进行初始均化后,除去含有可溶性蛋白质级分的上清液,并且可以使用十二烷基硫酸钠(SDS)作为洗涤剂进一步提取含有不溶性级分的沉淀物,以确保全细胞裂解(参见图1)。 这种方法可以通过降低样品的复杂性来促进低丰度蛋白质的分析。


图1.描述顺序提取过程的流程图

Preparation of Crude Synaptosomal Fractions from Mouse Brains and Spinal Cords
Author:
Date:
2017-08-05
[Abstract]  The current protocol describes the preparation of crude synaptosomal fractions from mouse brain or spinal cord samples. In detail, a sequential protocol yielding crude synaptosomal and light membrane fractions is provided. This fast and easy method might be sufficient to assess the amount of synaptic proteins in down-steam applications like Western-blot or ELISA in e.g., mouse models of Alzheimer’s disease or other neurodegenerative conditions. [摘要]  目前的方案描述了从小鼠脑或脊髓样品制备粗突触体部分。 详细地,提供了产生粗突触体和轻质膜部分的顺序方案。 这种快速和容易的方法可能足以在例如阿尔茨海默病或其他神经变性病症的小鼠模型中评估下蒸汽应用中的突触蛋白质的量,例如Western印迹或ELISA。
【背景】分析突触体,代表孤立的突触终端从神经元,可以产生有价值的信息,在不同的神经系统疾病的突触完整性。它们含有在特定条件下脑匀浆后从轴突末端脱离的膜结合区。目前的方案描述了一种快速和简便的浓缩粗突变体级分的方法(见图1)。这些可以用于通过蛋白质印迹定量突触蛋白质,或者可以使用密度梯度离心法进一步纯化以产生高度纯化的突触体亚级分(Gurd等人,1974)。粗突触体部分的制备可能足以评估例如的突触前和突触后蛋白如SNAP25或突触后密度蛋白95(PSD95)的量,例如,具有神经变性表型的小鼠模型(Breyhan等人,2009; Saul and Wirths,2017)。


图1.描述顺序提取过程的流程图

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