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Author:
Date:
2017-08-05
[Abstract] This is a protocol for isolation of guard cell enriched samples from Arabidopsis thaliana plants for RNA extraction. Leaves are blended in ice-water and filtered through nylon mesh to obtain guard cell enriched fragments. With guard cell enriched samples, gene expression analysis can be done, e.g., comparing different gene expression levels in guard cells versus whole leaf to determine if a gene of interest is predominantly expressed in guard cells. It can also be used to study the effect of treatments or different genetic backgrounds in the regulation of the guard cell expressed genes.
[摘要] 这是用于从拟南芥植物中分离用于RNA提取的保护性细胞富集样品的方案。 将叶子混合在冰水中，并通过尼龙网过滤，获得保护细胞富集片段。 使用保卫性细胞富集的样品，可以进行基因表达分析，例如，比较保卫细胞中的不同基因表达水平与全叶，以确定感兴趣的基因是否主要在保卫细胞中表达。 它也可用于研究治疗或不同遗传背景对保卫细胞表达基因调控的影响。
【背景】RNA提取的保卫细胞的分离传统上依赖于保卫细胞原生质体提取（Leonhardt等人，2004）或表皮剥皮（Pandey等人，2010）。也已经使用了保护细胞从冷冻干燥的叶中的手工解剖（Bates等人，2012）。原生质体程序可能会从伤口效应引起基因表达的不必要的变化，而其他方法是耗时的，需要特殊的设备或昂贵的试剂（例如转录抑制剂）。因此，需要一种快速和简单的方案来分离保护细胞进行基因表达分析。在这里，我们进一步描述了以不含叶肉和其他血管细胞的表皮碎片的形式分离保卫性细胞富集组织（Bauer等人，2013）的快速冰混合器方法。该方法使用尼龙网从混合叶组织收集表皮。尼龙网足够大的孔径允许叶肉和其他血管细胞通过，同时保留表皮碎片。我们建议本协议中的关键因素是用于处理样品的混合器的类型。
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