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Date:
2017-08-05
[Abstract] Proteins that bind to and disrupt cell membranes may target specific phospholipids. Here we describe a protocol to identify the lipid targets of proteins and biomolecules. First, we describe a screen to identify lipids in membranes that are specifically bound by the biomolecule of interest. Second, we describe a method for determining if the presence of these lipids within membranes is necessary for membrane disruption. The methods described here were used to determine that the malaria vaccine candidate CelTOS disrupts cell membranes by specifically targeting phosphatidic acid (Jimah et al., 2016). This protocol has a companion protocol: ‘Liposome disruption assay to examine lytic properties of biomolecules’ which can be applied to examine the ability of the biomolecule to ...
[摘要] 结合细胞膜并破坏细胞膜的蛋白可能靶向特定的磷脂。 这里我们描述了一种鉴定蛋白质和生物分子的脂质靶标的方案。 首先，我们描述了一个屏幕，用于识别由感兴趣的生物分子特异性结合的膜中的脂质。 第二，我们描述了一种确定膜中这些脂质的存在是否是膜破坏所必需的方法。 这里描述的方法用于确定疟疾疫苗候选人CelTOS通过特异性靶向磷脂酸来破坏细胞膜（Jimah等人，2016）。 该协议具有协同协议：“脂质体破碎测定以检查生物分子的溶解性质”，其可用于检查生物分子破坏由按照该协议确定的脂质靶标组成的膜的能力（Jimah等人 ，2017）。
【背景】具有膜破坏活性的蛋白质和生物分子，例如孔形成或膜融合，可以靶向膜内的特定脂质。脂质特异性孔隙形成的实例包括取决于磷脂酸用于孔形成的疟原虫CelTOS和胆固醇依赖性细胞溶质蛋白（Jimah等人，2016; Lukoyanova et al。，2016）。 CelTOS（卵磷脂和子孢子的细胞遍历蛋白）是一种疟疾寄生虫蛋白，其通过孔形成破坏宿主细胞膜，以使得细胞遍历过程中寄生虫免受入侵的宿主细胞的退出（Kariu等人，2006） ; ...
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