| Overrepresentation Analyses of Differentially Expressed Genes in the Smut Fungus Ustilago bromivora during Saprophytic and in planta Growth
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Author:
Date:
2017-08-05
[Abstract] We have established the Ustilago bromivora–Brachypodium spp. interaction as a new model pathosystem for biotrophic fungal plant infections of the head smut type (Rabe et al., 2016). In this protocol, the methodology used for comparing gene expression between saprophytic and in planta growth of the fungus is described. The experimental and analytical pipeline, how next generation RNA sequencing (Illumina RNA-Seq) analysis can be used to obtain lists of genes significantly up or down regulated in planta in comparison to axenic culture is given. Furthermore, different methods to identify functional categories that are over- or under-represented among specific classes of genes are presented.
[摘要] 我们已经建立了Ustilago bromivora - Brachypodium spp。 作为一种用于生物营养真菌植物感染头虱类型的新模型病理学的相互作用（Rabe等人，2016）。 在该方案中，描述了用于比较真菌的植物生长中的腐生菌和萌发之间的基因表达的方法。 给出了实验和分析流程，如何使用下一代RNA测序（Illumina RNA-Seq）分析来获得与无性培养相比在植物中显着上调或下调的基因的列表。 此外，提出了识别在特定类型的基因中过度或低于代表的功能类别的不同方法。
【背景】RNA深度测序（RNA-Seq）是一种功能强大和通用的工具，可以了解细胞和生物体对环境变化的反应及其对新发育阶段的适应性。生活状况的显着变化是从酵母样生长转向非特异性病原体的丝状，致病性相关生长模式。我们研究了生物营养型真菌植物病原体（Ustilago ...
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| Gene Expression Analysis of Sorted Cells by RNA-seq in Drosophila Intestine
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Author:
Date:
2016-12-20
[Abstract] RNA sequencing (RNA-seq) has become a popular method for profiling gene expression. Among many applications, one common purpose is to identify differentially expressed genes and pathways in different biological or pathological conditions. This protocol provides detailed procedure for RNA-seq analysis of ~250,000 sorted Drosophila intestinal cells (Chen et al., 2016), in which RNA amplification is not required.
[摘要] RNA测序（RNA-seq）已经成为描述基因表达的流行方法。 在许多应用中，一个共同目的是在不同的生物学或病理学条件下鉴定差异表达的基因和途径。 该方案提供了〜250,000个分选的果蝇肠细胞的RNA-seq分析的详细程序（Chen等，2016），其中不需要RNA扩增。
【背景】RNA-seq的转录组分析已经成为鉴定不同生物或病理条件下差异表达基因和途径的常用方法。 对于产生低mRNA水平的样品，通常在深度测序之前进行RNA或cDNA扩增（Dutta等，2015）。 然而，这个程序可能会潜在地省略以低丰度表达的重要候选人。 在这里，我们提供了不需要RNA扩增的分选的果蝇肠细胞的RNA-seq分析的详细程序。
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