Live Imaging of Axonal Transport in the Motor Neurons of Drosophila Larvae
|
Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] Axonal transport, which is composed of microtubules, motor proteins and a variety of types of cargo, is a prominent feature of neurons. Monitoring these molecular dynamics is important to understand the biological processes of neurons as well as neurodegenerative disorders that are associated with axonal dysfunction. Here, we describe a protocol for monitoring the axonal transport of motor neurons in Drosophila larvae using inverted fluorescence microscopy.
[摘要] 由微管,运动蛋白和各种类型的货物组成的轴突运输是神经元的突出特征。 监测这些分子动力学对于了解神经元的生物过程以及与轴突功能障碍相关的神经退行性疾病是重要的。 在这里,我们描述了使用倒置荧光显微镜监测果蝇幼虫中运动神经元的轴突运输的协议。
【背景】轴突是一种独特的神经元结构,神经元通过该结构将电信号和化学信号传递给邻近的神经元,肌肉和其他组织。通过囊泡,细胞器和材料的循环流动或穿梭来维持轴突功能(Liu等人,2012; Wong等人,2012; Alami等人,2014)。轴突功能障碍被认为是神经退行性病变的早期征兆,并且是人类中阿尔茨海默病,帕金森病和运动神经元疾病等神经退行性疾病的原因(Hirokawa等人,2010; Millecamps and Julien,2013)。然而,在人类和哺乳动物模型中难以监测这些神经退行性疾病中的轴突变性过程。果蝇模型是研究分子遗传水平的神经退行性疾病的有力工具,并通过体内神经元的实时成像为治疗方法提供了重要的证据(Shiba-福岛等人,2014; Hosaka等人,2017)。直立荧光显微镜技术通常用于分析组织和器官培养物的活体成像。然而,由于其广泛的实用性和可扩展性,倒置荧光显微镜已经看到需求增加。在这里,我们介绍我们的协议来分析使用倒置荧光显微镜的果蝇的第三龄幼虫的运动神经元的轴突运输。
|
|
Primary Culture System for Germ Cells from Caenorhabditis elegans Tumorous Germline Mutants
|
Author:
Date:
2017-08-05
[Abstract] The Caenorhabditis elegans germ line is an important model system for the study of germ stem cells. Wild-type C. elegans germ cells are syncytial and therefore cannot be isolated in in vitro cultures. In contrast, the germ cells from tumorous mutants can be fully cellularized and isolated intact from the mutant animals. Here we describe a detailed protocol for the isolation of germ cells from tumorous mutants that allows the germ cells to be maintained for extended periods in an in vitro primary culture. This protocol has been adapted from Chaudhari et al., 2016.
[摘要] 秀丽隐杆线虫种系是胚芽干细胞研究的重要模型系统。 野生型C。 线虫生殖细胞是合胞体,因此不能在体外培养中分离。 相比之下,来自肿瘤突变体的生殖细胞可以完全被细胞化并从突变动物中完整分离。 在这里,我们描述了从肿瘤突变体中分离生殖细胞的详细方案,其允许生殖细胞在体外原代培养中长时间维持。 该协议已从2016年Chaudhari等人改编。 【背景】秀丽生殖细胞在位于两个性腺臂的远端区域的两个成体干细胞龛中产生(Hansen和Schedl,2013; Kimble和Seidel,2013)。在野生型雌雄同体中,有丝分裂生殖细胞仅限于性腺臂的远端,干细胞生态位。野生型生殖细胞是合胞体,并且包含延伸通过性腺臂中心区域的共同细胞质的开口。 ℃。线虫肿瘤种系突变体在整个性腺中增加了生殖细胞的有丝分裂增殖。我们发现肿瘤种系突变体通常具有完整的细胞生殖细胞,其含有完整的质膜(Chaudhari等人,2016)。这种细胞化允许生殖细胞的分离及其在培养中的维持。该方案描述了分离和维持培养物中肿瘤突变体的生殖细胞的方法学和组织培养基。虽然已经描述了用于C的主要培养物的培养基。 elegans 胚胎和幼虫细胞(Strange等人,2007; Zhang和Kuhn,2013),生殖细胞在这种培养基中不能存活(Chaudhari等人。 ...
|
|