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Date:
2017-08-05
[Abstract] We present a CRISPR-Cas based technique for deleting genes from the T7 bacteriophage genome. A DNA fragment encoding homologous arms to the target gene to be deleted is first cloned into a plasmid. The T7 phage is then propagated in Escherichia coli harboring this plasmid. During this propagation, some phage genomes undergo homologous recombination with the plasmid, thus deleting the targeted gene. To select for these genomes, the CRISPR-Cas system is used to cleave non-edited genomes, enabling isolation of the desired recombinant phages. This protocol allows seamless deletion of desired genes in a T7 phage, and can be expanded to other phages and other types of genetic manipulations as well.
[摘要] 我们提出了一种用于从T7噬菌体基因组中删除基因的基于CRISPR-Cas的技术。 首先将编码与待缺失的靶基因的同源臂的DNA片段克隆到质粒中。 然后将T7噬菌体在携带该质粒的大肠杆菌中繁殖。 在这种繁殖期间，一些噬菌体基因组与质粒进行同源重组，从而缺失靶基因。 为了选择这些基因组，CRISPR-Cas系统用于切割未编辑的基因组，从而能够分离所需的重组噬菌体。 该协议允许在T7噬菌体中无缝地删除所需的基因，并且可以扩展到其它噬菌体和其他类型的遗传操作。
【背景】噬菌体（噬菌体）是生物圈中最普遍和广泛分布的生物实体，突出了它们的生态重要性（Suttle，2007）。许多研究还提出将噬菌体用于医疗目的（Weber-Dabrowska等人，2001; Merril等人，2003; Harper和Enright，2011; Edgar ，2012; Bikard等人，2014; Citorik等人，2014; Yosef等人， 2014年和2015年）。不幸的是，仅有少数公开的方法详细描述了噬菌体基因组学的基因工程（Selick等人，1988; Marinelli等人，2008; ...
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