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Eppendorf Research® plus

Company: Eppendorf
Catalog#: 3123000063
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Preserve Cultured Cell Cytonemes through a Modified Electron Microscopy Fixation
Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract]  Immunocytochemistry of cultured cells is a common and effective technique for determining compositions and localizations of proteins within cellular structures. However, traditional cultured cell fixation and staining protocols are not effective in preserving cultured cell cytonemes, long specialized filopodia that are dedicated to morphogen transport. As a result, limited mechanistic interrogation has been performed to assess their regulation. We developed a fixation protocol for cultured cells that preserves cytonemes, which allows for immunofluorescent analysis of endogenous and over-expressed proteins localizing to the delicate cellular structures. [摘要]  培养细胞的免疫细胞化学是用于确定细胞结构内蛋白质的组成和定位的常用且有效的技术。 然而,传统的培养细胞固定和染色方案不能有效地保存培养的细胞色素,长期专门用于形态发生转运的丝状伪足。 结果,进行了有限的机械审讯以评估其监管。 我们开发了一种用于培养细胞的固定方案,该方案保留了细胞质,允许对内源性和过表达的蛋白质进行免疫荧光分析,这些蛋白质定位于脆弱的细胞结构。

【背景】Cytonemes被分类为薄的(~200nm直径)基于肌动蛋白的丝状伪足,长度超过2μm,可以转运形态发生素(Ramírez-Weber和Kornberg,1999)。这些信号结构首先在发育中的 Drosophila 翼成像盘中进行了详细分类和描述,随后在小鼠,小鸡和斑马鱼模型生物中进行了观察(Ramírez-Weber和Kornberg,1999; Sanders et al。,2013; Stanganello et al。,2015)。在大多数情况下,只有对过表达的荧光标记蛋白进行实时成像才能进行细胞色素检测。由于传统的固定方案未能保存这些脆弱的细丝,因此对培养细胞的细胞色素的检查受到限制。这些并发症一直是决定在发育和组织稳态期间驱动细胞色素形成和功能的细胞机制以及确定这些过程是否在疾病中被破坏的限制因素。

为了克服这些限制,我们开发了一种基于修饰电子显微镜固定剂(MEM-fix)的方案,该方案可以保留培养细胞的细胞质。 ...

Assessment of Uptake and Biodistribution of Radiolabeled Cholesterol in Mice Using Gavaged Recombinant Triglyceride-rich Lipoprotein Particles (rTRL)
Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract]  The here described method can be used to estimate the uptake of orally provided cholesterol in mice. Briefly, mice are gavaged with radiolabeled cholesterol and 4 h later, organ distribution of the radiolabel is determined by liquid scintillation counting. The method has been applied successfully to determine dietary cholesterol handling of mice housed at different ambient temperatures [摘要]  这里描述的方法可用于估计小鼠口服提供的胆固醇的摄取。 简而言之,用放射性标记的胆固醇强饲小鼠,4小时后,通过液体闪烁计数测定放射性标记的器官分布。 该方法已成功应用于确定在不同环境温度下饲养的小鼠的膳食胆固醇处理

【背景】胆固醇促进膜的流动性,并且是类固醇激素,胆汁酸和维生素D的前体。动物通过饮食或通过 de novo 合成提供胆固醇。胆固醇的过剩可能是有害的,因为它在血管壁中的积累可导致动脉粥样硬化。已经表明,通过冷处理棕色脂肪组织(BAT)可以降低高胆固醇血症(Berbee 等,,2015)。然而,尚不清楚最佳可行技术活动是否会改变急性外周膳食胆固醇处理。为了解决这个问题,我们口服给予小鼠富含重组富含甘油三酯的脂蛋白颗粒(rTRL),用[4- 14 C] - 胆固醇标记,并在管饲后4小时测量放射性标记的器官分布。之前已经测量了放射性标记的胆固醇体内的生物分布(Szigeti 等,,1972; Townsend et al。,2001)。然而,在这些研究中,放射性胆固醇由饮食提供或静脉注射。此外,其他研究评估了较长时间内(48和72小时)的胆固醇吸收率(Zilversmit和Hughes,1974; Turley et ...

Implementation of Blue Light Switchable Bacterial Adhesion for Design of Biofilms
Author:
Date:
2018-06-20
[Abstract]  Control of bacterial adhesions to a substrate with high precision in space and time is important to form a well-defined biofilm. Here, we present a method to engineer bacteria such that they adhere specifically to substrates under blue light through the photoswitchable proteins nMag and pMag. This provides exquisite spatiotemporal remote control over these interactions. The engineered bacteria express pMag protein on the surface so that they can adhere to substrates with nMag protein immobilization under blue light, and reversibly detach in the dark. This process can be repeatedly turned on and off. In addition, the bacterial adhesion property can be adjusted by expressing different pMag proteins on the bacterial surface and altering light intensity. This protocol provides light ... [摘要]  在空间和时间上高精度地控制细菌粘附到基底对于形成明确的生物膜是重要的。 在这里,我们提出了一种方法来设计细菌,使其在蓝光下通过光可切换蛋白质nMag和pMag特异性地粘附在基底上。 这为这些交互提供了精妙的时空遥控。 工程菌在表面上表达pMag蛋白,以便它们可以在蓝光下与nMag蛋白固定化的基质粘附,并在黑暗中可逆地分离。 该过程可以重复开启和关闭。 此外,通过在细菌表面表达不同的pMag蛋白质并改变光强度可以调节细菌粘附性质。 该协议提供了可高度空间和时间分辨率的细菌粘附的光可切换,可逆和可调控制,这使我们能够以极大的灵活性在基底上图案化细菌。

【背景】控制生物膜形成对于了解细菌在自然发生的生物膜中的社会相互作用至关重要(Flemming et。,2016)。这对生物膜在生物催化,生物传感和废物处理中的生物技术应用也特别重要(Zhou等人,2013; Jensen等人,2016)。生物膜的形成始终始于细菌与底物的粘附,这决定了生物膜中的空间组织(Liu等人,2016; Nadell等人,2016)。已经提出了许多策略来控制细菌粘附,例如通过脂质体融合利用生物正交反应基团修饰细菌表面(Elahipanah等,2016),将粘附分子固定在基质上(Sankaran等,等),2015; Zhang等人,2016; ...

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