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NuncTM Disposable Loops and Needles

Company: Thermo Fisher Scientific
Catalog#: 253988
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Gene Dosage Experiments in Enterobacteriaceae Using Arabinose-regulated Promoters
Author:
Date:
2017-07-20
[Abstract]  This protocol is used to assay the effect of protein over-expression on fitness of E. coli. It is based on a plasmid expression of a protein of interest from an arabinose-regulated pBAD promoter followed by the measurement of the intracellular protein abundance by Western blot along with the measurement of growth parameters of E. coli cell expressing this protein. [摘要]  该方案用于测定蛋白质过表达对E适应度的影响。大肠杆菌。 它基于来自阿拉伯糖调节的pBAD启动子的目的蛋白的质粒表达,随后通过Western印迹测量细胞内蛋白质丰度以及E的生长参数的测量。 表达该蛋白质的大肠杆菌细胞。
【背景】基因剂量实验对于了解蛋白质过表达对健康的影响和确定蛋白质丰度的最佳水平至关重要。 几个基因即使在非常低的水平表达也是有毒的。 因此,重要的是从紧密调节的启动子表达蛋白质以使渗漏表达最小化。 在这里,我们已经阐明了在良好表征的阿拉伯糖诱导的pBAD启动子下的蛋白质表达的条件,并且设计了用于测量E细胞内丰度和适应度的方案。 含有过表达质粒的大肠杆菌细胞。

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