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Excella E24 temperature-controlled benchtop shaker

Company: Eppendorf
Catalog#: Excella® E24
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Nematode Epicuticle Visualisation by PeakForce Tapping Atomic Force Microscopy
Author:
Date:
2017-11-05
[Abstract]  The free-living soil nematode Caenorhabditis elegans has become an iconic experimental model animal in biology. This transparent animal can be easily imaged using optical microscopy to visualise its organs, tissues, single cells and subcellular events. The epicuticle of C. elegans nematodes has been studied at nanoscale using transmission and scanning (SEM) electron microscopies. As a result, imaging artefacts can appear due to embedding the worms into resins or coating the worms with a conductive gold layer. In addition, fixation and contrasting may also damage the cuticle. Conventional tapping mode atomic force microscopy (AFM) can be applied to image the cuticle of the dried nematodes in air, however this approach also suffers from imaging defects. Ideally, the ... [摘要]  自由生活的土壤线虫秀丽隐杆线虫已经成为生物学中一个标志性的实验动物模型。这种透明的动物可以很容易地使用光学显微镜成像,以可视化其器官,组织,单细胞和亚细胞事件。 C的角质层。已经使用透射和扫描(SEM)电子显微镜在纳米级研究了线虫线虫。结果,由于将蠕虫嵌入树脂或用导电金层涂覆蠕虫,可能出现成像伪像。另外,固定和对比也可能损伤角质层。传统的敲击模式原子力显微镜(AFM)可用于对干燥的线虫的角质层在空气中成像,然而这种方法也存在成像缺陷。理想情况下,线虫应该在类似自然环境的条件下成像。最近,我们报道了使用PeakForce攻丝AFM模式来成功实现可视化和数值表征。线虫角质层在空气和液体中均有表达(Fakhrullina et al。,2017)。我们成像的主要线虫表面结构和角质层的力学性能表征。该协议提供了对液体浸泡的AF的AFM成像的详细描述。线虫使用PeakForce攻丝原子力显微镜线虫。
【背景】自由生活和寄生虫的线虫由于其对农业和人类福祉的显着生物学效应而受到广泛的研究。显然,线虫中研究最多和最着名的物种是自由生活的土壤线虫秀丽隐杆线虫(Sterken等人,2015年)。这种蠕虫在许多研究中已被成功地用作多功能模式生物体(Fire等人,1998; Kenyon,2010; Swierczek等人,2011; O'Reilly等人,2014; ...

Non-radioactive LATS in vitro Kinase Assay
Author:
Date:
2017-07-20
[Abstract]  This protocol describes a method to directly measure LATS activity by an in vitro kinase assay using YAP as a substrate. [摘要]  该方案描述了通过使用YAP作为底物的体外激酶测定直接测量LATS活性的方法。
【背景】大肿瘤抑制剂1/2(LATS1 / 2)是河马途径的蛋白激酶和核心成分,其调节器官大小和组织稳态。 LATS激酶通过其疏水基序上的磷酸化被激活(HM,对于LATS1为Thr 1079,对于LATS2为Thr 1041)。 结果,在HM中识别LATS的抗体抗体的Western印迹提供了评估LATS激酶活性的间接方法(Data analysis,图1)。 此外,活性LATS在Ser 127磷酸化并抑制转录共激活物是相关蛋白(YAP),导致YAP结合到14-3-3和细胞质保留(Zhao等人,2007)。 在LATS体外激酶测定中使用YAP作为底物提供了直接评估LATS激酶活性的方法。 通过该测定,我们能够显示血清饥饿和山梨醇诱导的渗透激活LATS(Yu等人,2012; Hong等人,2017)和进一步的 导致YAP Ser 127磷酸化(数据分析,图2)。

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