| Drosophila Fecal Sampling
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Author:
Date:
2017-09-20
[Abstract] Fecal sampling is a non-invasive method which raises the possibility to study the development and the changes in the microbial community throughout different time points of a fly population or throughout different treatments. This method allows precise manipulation to trigger the fly’s physiology by nutritional interventions, bacterial infections or other stressors.
As in most other animals, the intestinal microbiota is essential for a healthy fly-life. Because Drosophila only harbors a relative simple bacterial community with a small variety of round about 8 to 10 different species, it is rather easy to build up the microbial community and to investigate microbial changes after treatment.
Another positive effect using the fly’s feces is that bacteria that ...
[摘要] 粪便取样是一种非侵入性方法，提高了在飞行群体的不同时间点或整个不同处理过程中研究微生物群落的发展和变化的可能性。这种方法允许精确的操纵通过营养干预，细菌感染或其他压力源触发苍蝇的生理学。
与大多数其他动物一样，肠道微生物群对健康的飞行生命至关重要。因为果蝇只拥有一个相对简单的细菌群落，有大约8到10个不同种类的小种，很容易建立微生物群落，并在处理后调查微生物的变化。
使用蝇的粪便的另一个积极作用是不是肠微生物群的一部分的细菌，例如Wolbachia，可以直接从分析中排除，因为它们不会排泄。
使用这种方法，生成的数据集可能反映了在简单飞行模型中研究微生物组织相关疾病的一个很好的范例，此外，可以以高通量方法测试药物。
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| Measurement of Energy-dependent Rhodamine 6G Efflux in Yeast Species
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Author:
Date:
2017-08-05
[Abstract] Rhodamine 6G is a highly fluorescent dye often used to determine the transport activity of yeast membrane efflux pumps. The ATP-binding cassette transporter KlPdr5p confers resistance to several unrelated drugs in Kluyveromyces lactis. KlPdr5p also extrudes rhodamine 6G (R6G) from intact yeast cells in an energy-dependent manner. Incubation of yeast cells in the presence of 2-deoxy-D-glucose (inhibitor of glycolysis) and R6G (mitochondrial ATPase inhibitor) leads to marked depletion of intracellular ATP pool (Kolaczkowski et al., 1996). An active KlPdr5p mediated extrusion of R6G from intact yeast cells can be followed by direct measurement of the fluorescence of extruded R6G in the assay buffer.
[摘要] 罗丹明6G是一种高荧光染料，常用于测定酵母膜外排泵的运输活性。 ATP结合盒转运蛋白Klr5p赋予乳酸克鲁维酵酵菌中几种不相关药物的抗性。 Pdr5p还以能量依赖的方式从完整的酵母细胞中挤出罗丹明6G（R6G）。 在2-脱氧-D-葡萄糖（糖酵解抑制剂）和R6G（线粒体ATP酶抑制剂）存在下酵母细胞的孵育导致细胞内ATP池的显着消耗（Kolaczkowski等人，1996）。 从完整的酵母细胞中可以直接测量R6G的荧光的直接测量PdF5p介导的来自完整酵母细胞的R6G的挤出。
【背景】多药物外排泵广泛分布，可在所有生物种类中找到。它们代表抗菌素耐药性的重要机制。量化外排泵活性的能力对于理解其对生理过程的贡献和评估潜在治疗药物（例如，外排抑制剂）的有效性（Blair和Piddock，2016）是必要的。外排活动测量的方法主要依赖于两种不同的机制。一些方法直接测量底物流出，即，多少基质被泵出，其他方法测量细胞内的底物分子积累，其水平然后用于间接推断流出。然而，后者由于可改变膜渗透性而改变了染料流入速率（Blair和Piddock，2016）的敏感性较差。 R6G在生长中的积累。白念珠菌细胞与ABC转运蛋白念珠菌药物抗性1（CDR1 ...
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| Implantation of Human Peripheral Corneal Spheres into Cadaveric Human Corneal Tissue
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Author:
Date:
2017-07-20
[Abstract] Stem and progenitor cells isolated from human limbal tissue can be cultured in vitro as spheres. These spheres have potential for use as transplantable elements for the repopulation of corneal tissue (Mathan et al., 2016). Herein we describe the detailed protocol for the implantation of human corneal spheres into cadaveric human corneal tissue. This protocol describes the procedure for sphere formation and culture, preparation of tissue for sphere implantation, corneal limbus microsurgery and sphere implantation.
[摘要] 可以将从人角膜缘组织分离的茎细胞和祖细胞作为球体体外培养。 这些球体有可能用作角膜组织再造的可移植元件（Mathan等人，2016）。 这里我们描述了将人角膜球植入尸体人角膜组织的详细方案。 该协议描述了球形成和培养的过程，球体植入组织的制备，角膜缘显微外科手术和球体植入。
【背景】以前的研究集中在隔离角膜缘细胞，这些细胞完全是上皮细胞（角膜缘干细胞）或基质（角质细胞祖细胞），以破译他们在角膜内稳态和伤口修复中的各自角色。 该方案旨在通过其在培养物中形成球体的功能能力来分离角膜缘细胞，并且其本质将包括上皮和间质的多种细胞，其有助于角膜缘的形成。 在分离这些球体之后，我们正在调查其在植入后角膜修复中的潜在用途。 在这里，我们描述了一种用于将这些球体植入人角膜组织和下游分析的体外手术方案。
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