| Isolation of Phages Infecting Marinomonas mediterranea by an Enrichment Protocol
|
|
Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract] This protocol describes the isolation of lytic phages infecting the marine bacterium Marinomonas mediterranea from samples of seawater, sand, and seagrass from Posidonia oceanica meadows. It includes the collection of samples, the enrichment method and the isolation and purification of the phages using double layer agar plates. Although the method has been optimized for M. mediterranea, it might be used in the isolation of phages infecting other Marinomonas species and marine bacteria.
[摘要] 该协议描述了从 Posidonia oceanica 草甸的海水，沙子和海草样品中分离感染海洋细菌 Marinomonas mediterranea 的裂解噬菌体。 它包括样品的收集，富集方法以及使用双层琼脂平板分离和纯化噬菌体。 虽然该方法已针对 M进行了优化。 地中海，它可能用于分离感染其他 Marinomonas 物种和海洋细菌的噬菌体。
【背景】CRISPR-Cas系统通过获取侵入性元件的核酸的短片段（间隔物），在原核生物中提供针对遗传感染的适应性免疫。这些“感染的分子记忆”用于产生指导RNA，其在新的感染发生时将Cas核酸酶靶向病原体。间隔区直接存储在宿主的基因组中，散布在CRISPR阵列的定向重复序列之间。对原核基因组以及宏基因组数据集中间隔序列库的分析突出了大量未发现的遗传病原体，这些病原体是CRISPR-Cas系统的靶标（Shmakov et al。，2017） 。感染感兴趣的微生物的噬菌体的分离可以提供对自然环境中CRISPR-Cas系统的作用机制的重要见解。
在这项工作中，我们提供了一种简单而廉价的方法，用于从该微生物的自然环境中分离感染模型细菌 Marinomonas mediterranea ...
|
|
|
| Isolation of Fucus serratus Gametes and Cultivation of the Zygotes
|
|
Author:
Date:
2017-07-20
[Abstract] Zygotes of the Fucale species are a powerful model system to study cell polarization and asymmetrical cell division (Bisgrove and Kropf, 2008). The Fucale species of brown algae grow in the intertidal zone where they reproduce by releasing large female eggs and mobile sperm in the surrounding seawater. The gamete release can be induced from sexually mature fronds in the laboratory and thousands of synchronously developing zygotes are easily obtained. In contrast to other eukaryotic models, such as land plants (Brownlee and Berger, 1995), the embryo is free of maternal tissues and therefore readily amenable to pharmacological approaches. The zygotes are relatively large (up to 100 µm in diameter), facilitating manipulations and imaging studies. During the first hours of zygote development, ...
[摘要] Fucale物种的合作伙伴是研究细胞极化和不对称细胞分裂的强大模型系统（Bisgrove和Kropf，2008）。棕色藻类的Fucale种类在潮间带中生长，通过在周围海水中释放大的雌性卵和移动精子繁殖。配子释放可以从实验室的性成熟叶子诱导，并且容易获得成千上万的同步发育的合子。与其他真核生物模型（如陆地植物（Brownlee和Berger，1995））相反，胚胎没有母体组织，因此很容易接受药理学方法。受精卵相对较大（直径可达100μm），便于操作和成像研究。在合子开发的第一个小时，轴与光线等外部线索的对准不稳定，可以通过不同方向的光梯度反转。在芽根出现前几小时，轴和极性的对齐是固定的，并且细胞相应地发芽。在这个阶段，合子通过细胞壁粘合剂材料的分泌（Kropf等人，1988;Hervé等人，2016）自然地附着在基质上。第一个细胞分裂发生在受精后约24小时，早期胚胎仅由两种细胞类型组成，其尺寸，形状和发育命运（，thallus细胞和根际细胞）不同（Bouget 等人，1998）。胚胎可以在实验室中成功培养数日（最多4周），并且在早期阶段具有不变的分裂模式，可以使组织学上追踪细胞谱系。
【背景】该协议提供了隔离Fucus spp的雄性和雌性配子的说明。 用于体外受精，并讨论如何监测所产生的受精卵和早期胚胎的发育。 这些说明是为了使用雌雄异株（Fucus ...
|
|
|