| Measurement of Ascorbic Acid and Glutathione Content in Cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803
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Author:
Date:
2020-10-20
[Abstract] Ascorbic acid (AsA) and gluthathione (GSH) are two key components of the antioxidant machinery of eukaryotic and prokaryotic cells. The cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803 presents both compounds in different concentrations (AsA, 20-100 μM and GSH, 2-5 mM). Therefore, it is important to have precise and sensitive methods to determine the redox status in the cell and to detect variations in this antioxidants. In this protocol, we describe an improved method to estimate the content of both antioxidants (in their reduced and oxidized forms) from the same sample obtained from liquid cultures of Synechocystis sp. PCC 6803.
[摘要] [摘要] 抗坏血酸（AsA）和明胶硫（GSH）是真核细胞和原核细胞抗氧化机制的两个重要组成部分。蓝藻Synechocystis sp.pcc6803以不同浓度（AsA，20-100μM和GSH，2-5mm）呈现这两种化合物。因此，有精确和敏感的方法来确定细胞中的氧化还原状态和检测这种抗氧化剂的变化是很重要的。在该方案中，我们描述了一种改进的方法，用以从Synechocystis sp.pcc6803的液体培养中获得的同一样品中估算两种抗氧化剂（以还原形式和氧化形式）的含量。
[背景] 细胞中的氧化还原状态可以被多种因素改变，产生氧化应激。我们使用该方案来量化暴露于50℃高温下的Synechocystis sp. PCC 6803中的GSH和AsA含量。如拟南芥所述，热胁迫导致抗氧化剂含量下降，并通过铁作用引起细胞死亡(Distefano et al.， 2017;Aguilera等人，2019年预印本)。虽然本方案是针对Synechocystis sp. PCC 6803制定的，但也可用于测定其他蓝藻中GSH和AsA的含量。蓝藻中AsA含量很低，正常条件下uM含量在一定范围内，某些处理下pM含量在一定范围内。因此，我们提出了这个敏感的方法与一个改进的细胞裂解程序。
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| Pentylenetetrazole (PTZ)-induced Convulsion Assay to Determine GABAergic Defects in Caenorhabditis elegans
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Author:
Date:
2018-09-05
[Abstract] Pentylenetetrazole (PTZ) is a GABAA receptor antagonist and is used to monitor presynaptic defects in the release of the inhibitory neurotransmitter GABA. PTZ is a competitive inhibitor of GABA, and prevents binding of GABA on the GABAA receptors present on the surface of muscle. In the absence of GABA binding, the excitatory to inhibitory signal ratio increases resulting in a convulsive phenotype. This assay provides a fast and reliable method to detect presynaptic defects in GABAergic synaptic transmission. The assay is based on correlating the extent of convulsions with the degree of presynaptic GABA release defects.
[摘要] 戊四唑（PTZ）是GABA A 受体拮抗剂，用于监测抑制性神经递质GABA释放中的突触前缺陷。 PTZ是GABA的竞争性抑制剂，并且阻止GABA与肌肉表面上存在的GABA A 受体结合。 在没有GABA结合的情况下，抑制信号比的兴奋性增加导致惊厥表型。 该试验提供了一种快速可靠的方法来检测GABA能突触传递中的突触前缺陷。 该测定基于将惊厥的程度与突触前GABA释放缺陷的程度相关联。
【背景】突触是介导突触传递的不对称细胞间连接。它们构成了能够执行复杂行为的大脑电路的基本单元。动作电位的到达通过电压门控钙通道引起钙流入，导致质膜的去极化。在这种突触前去极化后，突触囊泡与质膜融合，通过高度控制的过程将其内容物释放到突触间隙中（Sudhof，1995; Sudhof，2004）。
运动是 Caenorhabditis elegans 中突出的行为输出。产生协调的背腹窦弯曲的神经回路允许 C中的正常运动。线虫。运动行为在多个层面上进行协调，并且涉及由中间神经元处理的多个感觉神经元整合多种感觉线索，并最终在神经肌肉接头（NMJ）处直接变化（de Bono和Maricq，2005; Bargmann，2012）。 C.线虫 NMJ有三个主要组成部分;兴奋性胆碱能运动神经元，抑制性GABA能神经运动神经元和突触后肌细胞（White et ...
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| Analysis of Metals in Whole Cells, Thylakoids and Photosynthetic Protein Complexes in Synechocystis sp. PCC6803
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Author:
Date:
2018-06-20
[Abstract] Metals are essential in many biological processes, including oxygenic photosynthesis. Here we described a method to measure the metal pool in whole cells and thylakoids, including the bioactive pool in intact photosynthetic protein complexes in the model oxygenic cyanobacterium Synechocystis PCC6803. In the first part of the protocol, whole cells and thylakoid membranes are carefully prepared, in which the total metal concentrations are measured by inductively coupled plasma triple-quadrupole mass spectrometry (ICP-QQQ-MS). In the second part of the protocol, isolated thylakoids are solubilized to release the integral membrane proteins and the metal binding protein complexes. These intact photosynthetic protein complexes are subjected to size exclusion chromatography (SEC) and ...
[摘要] 金属在许多生物过程中是必不可少的，包括含氧光合作用。 在这里我们描述了测量全细胞和类囊体中金属库的方法，包括模型含氧蓝藻PCH6803中完整光合蛋白复合体中的生物活性库。 在方案的第一部分中，仔细制备全细胞和类囊体膜，其中通过电感耦合等离子体三重四极杆质谱（ICP-MS / MS）测量总金属浓度。 在该方案的第二部分，分离的类囊体被溶解以释放完整的膜蛋白和金属结合蛋白复合物。 将这些完整的光合蛋白复合物进行尺寸排阻色谱（SEC），并通过ICP-MS / MS进行连接分析尺寸分离的复合物中的金属结合。
【背景】氧光合作用的过程需要金属，因为它们在光合电子传递链中作为辅因子和催化剂的基本功能。光合装置需要Fe-S簇，血红素桥Fe和非血红素Fe形式的铁（Fe），可溶性移动电子载体蛋白质质体蓝素中的铜（Cu），叶绿素中的镁（Mg）， ...
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