| In-vitro and in-planta Botrytis cinerea Inoculation Assays for Tomato
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Author:
Date:
2018-04-20
[Abstract] Botrytis cinerea (B. cinerea) attacks many crops of economic importance, represents one of the most extensively studied necrotrophic pathogens. Inoculation of B. cinerea and phenotypic analysis of plant resistance are key procedures to investigate the mechanism of plant immunity. Here we describe a protocol for B. cinerea inoculation on medium and planta based on our study using the tomato-B. cinerea system.
[摘要] 灰葡萄孢（Botrytis cinerea）（ B. cinerea ）攻击许多经济重要作物，代表了研究最广泛的坏死营养病原体之一。 接种 B。 cinerea 和植物抗性的表型分析是研究植物免疫机制的关键程序。 这里我们描述一个用于 B的协议。 基于我们使用番茄B的研究，在培养基和植物上接种灰霉病菌。 cinerea 系统。
【背景】 B中。在全世界超过200种作物中，包括许多重要的蔬菜和小型水果作物，“灰霉病”导致严重损失。广谱病原体可以感染植物茎，叶，花和果实以产生孢子（Dean等人，2012; van Kan等人，2017），其中喜欢在高湿度下发生（Elad等人，2007年）。产生的孢子对多种宿主构成持久的威胁（Elad et al。，2007）。基于其科学和经济的重要性， B。被评为第二大植物致病真菌（Dean等，2012）。在 B中。 cinerea宿主植物，番茄（Solanum lycopersicum）是一种经济上有价值的物种，也可作为研究植物免疫力的经典模型（Ryan，2000; Sun等人， em>，2011; Rosli和Martin，2015）。为了研究植物对 ...
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| MicroScale Thermophoresis as a Tool to Study Protein-peptide Interactions in the Context of Large Eukaryotic Protein Complexes
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] Protein-peptide interactions are part of many physiological processes, for example, epigenetics where peptide regions of histone complexes are crucial for regulation of chromatin structure. Short peptides are often also used as alternatives to small molecule drugs to target protein complexes. Studying the interactions between proteins and peptides is thus an important task in systems biology, cell biology, biochemistry, and drug design. However, this task is often hampered by the drawbacks of classical biophysical methods for analysis of molecular interactions like surface plasmon resonance (SPR) or isothermal titration calorimetry (ITC), which require immobilization of the interaction partners or very high sample concentrations. MicroScale Thermophoresis (MST) is an innovative method ...
[摘要] 蛋白质 - 肽相互作用是许多生理过程的一部分，例如表观遗传学，其中组蛋白复合物的肽区域对于染色质结构的调节是至关重要的。短肽通常也被用作小分子药物靶向蛋白质复合物的替代物。研究蛋白质和肽之间的相互作用是系统生物学，细胞生物学，生物化学和药物设计中的重要任务。然而，这一任务往往受到经典生物物理学方法分析分子间相互作用的缺陷的困扰，例如表面等离子体共振（SPR）或等温滴定量热法（ITC），其需要固定相互作用配偶体或非常高的样品浓度。 MicroScale热泳（MST）是一种创新的方法，可以确定分子间相互作用的重要参数，如解离常数，化学计量和热力学。而且，它可以快速准确地进行，可以自由选择缓冲液或生物液体，不需要固定样品，样品消耗也非常少。这里我们详细描述了两个MST测定法，其分析（i）真核RNA聚合酶II的某些肽段与真核转录延伸复合物的蛋白质亚基之间的相互作用和（ii）N-末端组蛋白尾肽与表观遗传学之间的相互作用读者蛋白质。这些实验表明，MST能够表征蛋白质 - 肽相互作用，这些相互作用仅由肽的微小变化触发，例如，在特定的丝氨酸残基处仅有一个磷酸化。
【背景】生物学背景：蛋白质 - ...
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| [2-3H]Mannose-labeling and Analysis of N-linked Oligosaccharides
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Author:
Date:
2017-07-20
[Abstract] Modifications of N-linked oligosaccharides of glycoproteins soon after their biosynthesis correlate to glycoprotein folding status. These alterations can be detected in a sensitive way by pulse-chase analysis of [2-3H]mannose-labeled glycoproteins, with enzymatic removal of labeled N-glycans, separation according to size by HPLC and radioactive detection in a scintillation counter.
[摘要] 其生物合成后不久，糖蛋白的N-连接寡糖的修饰与糖蛋白折叠状态相关。 可以通过脉冲追踪分析[2- 3 H]甘露糖标记的糖蛋白，通过酶切除标记的N-聚糖来检测这些变化，根据大小通过HPLC分离和放射性 在闪烁计数器中检测。
【背景】在将新生多肽进入ER后，进行若干翻译后修饰，这对于折叠，成熟和质量控制过程至关重要。加入核糖寡糖Glc 3 N 3 GlcNAc 2以产生N-连接的糖蛋白是非常常见的修饰，首先发生（Benyair等人，2011）。前体N-聚糖的加工通过在早期分泌室（Tannous等人，2015）中创建识别标签来引导糖蛋白成熟和质量控制机制。在后期阶段，在整个分泌途径中，寡糖的核心作为将糖链扩展成复合聚糖的平台，其结构涉及糖蛋白的运输和功能（Kamiya等人， ，2012）。由于早期N-连接的聚糖修饰反映糖蛋白生物合成和质量控制，寡糖加工已成为许多研究的主题（Avezov等人，2010; Hosokawa等人。，2010; Ninagawa等人，2014; Ogen-Shtern等人，2016）。糖蛋白组学方法大大改善了N-聚糖的表征，但它们不允许研究早期分泌途径中聚糖加工的动力学。
＆NBSP;这里我们描述一种用于分离和分析代谢标记的N-连接寡糖的简化脉冲追踪方法。该方法包括通过[2- H] ...
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