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Biochrom WPA Biowave II Spectrophotometer

Company: Biochrom
Catalog#: Biochrom WPA Biowave II
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Non-radioactive LATS in vitro Kinase Assay
Author:
Date:
2017-07-20
[Abstract]  This protocol describes a method to directly measure LATS activity by an in vitro kinase assay using YAP as a substrate. [摘要]  该方案描述了通过使用YAP作为底物的体外激酶测定直接测量LATS活性的方法。
【背景】大肿瘤抑制剂1/2(LATS1 / 2)是河马途径的蛋白激酶和核心成分,其调节器官大小和组织稳态。 LATS激酶通过其疏水基序上的磷酸化被激活(HM,对于LATS1为Thr 1079,对于LATS2为Thr 1041)。 结果,在HM中识别LATS的抗体抗体的Western印迹提供了评估LATS激酶活性的间接方法(Data analysis,图1)。 此外,活性LATS在Ser 127磷酸化并抑制转录共激活物是相关蛋白(YAP),导致YAP结合到14-3-3和细胞质保留(Zhao等人,2007)。 在LATS体外激酶测定中使用YAP作为底物提供了直接评估LATS激酶活性的方法。 通过该测定,我们能够显示血清饥饿和山梨醇诱导的渗透激活LATS(Yu等人,2012; Hong等人,2017)和进一步的 导致YAP Ser 127磷酸化(数据分析,图2)。

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