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Author:
Date:
2017-09-20
[Abstract] In plant cells, the analysis of protein S-nitrosothiols (SNOs) under physiological and adverse stress conditions is essential to understand the mechanisms of Nitric oxide (NO)-based signaling. We adapted a previously reported protocol for detecting protein SNOs in animal systems (King et al., 2005) for plant samples. Briefly, proteins from plant samples are separated via non-reducing SDS-PAGE, then the NO bound by S-nitrosylated proteins is released using UV light and, finally, the NO is detected using the fluorescent probe DAF-FM (Rodriguez-Ruiz et al., 2017). Thus, the approach presented here provides a relatively quick and economical procedure that can be used to compare protein SNOs content in plant samples and provide insight in NO-based signaling ...
[摘要] 在植物细胞中，生理和不利胁迫条件下的蛋白质S-亚硝基硫醇（SNO）的分析对于了解一氧化氮（NO）的信号传导机制至关重要。 我们调整了以前报告的用于检测动物系统中蛋白质SNO的方法（King等，2005），用于植物样品。 简言之，通过非还原性SDS-PAGE分离来自植物样品的蛋白质，然后使用UV光释放由S-亚硝基化蛋白质结合的NO，最后使用荧光探针DAF-FM检测NO（Rodriguez-Ruiz et 等等，2017）。 因此，本文提出的方法提供了相对快速和经济的方法，可用于比较植物样品中的蛋白质SNOs含量，并提供植物中基于NO的信号传导的洞察。
【背景】一氧化氮（NO）是一种自由基，可与各种生物分子阵列相互作用，包括蛋白质，脂质和核酸。在蛋白质的情况下，最相关的翻译后修饰（PTM）之一是NO基团与存在于肽或蛋白质中的半胱氨酸（Cys）的硫醇（-SH）侧链的共价连接。该修饰产生称为S-亚硝基硫醇（SNO）的家族，其是动物和植物系统中重要的化合物（Foster等人，2003; Lindermayr和Durner，2009; Astier等人，2011; ...
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Author:
Date:
2017-07-20
[Abstract] 6-Phosphogluconate dehydrogenase (6PGDH; EC 1.1.1.44) catalyzes the third and irreversible reaction of the pentose phosphate pathway (PPP). It carries out the oxidative decarboxylation of the 6-phosphogluconate to yield ribulose-5-phosphate, carbon dioxide and NADPH. In higher plants, 6PGDH has several subcellular localizations including cytosol, chloroplast, mitochondria and peroxisomes (Corpas et al., 1998; Krepinsky et al., 2001; Mateos et al., 2009; Fernández-Fernández and Corpas, 2016; Hölscher et al., 2016). Using Arabidopsis thaliana as plant model and sweet pepper (Capsicum annuum L.) fruits as a plant with agronomical interest, this protocol illustrates how to prepare the plant extracts for the separation of the potential ...
[摘要] 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6PGDH; EC 1.1.1.44）催化戊糖磷酸途径（PPP）的第三次和不可逆反应。它进行6-磷酸葡萄糖酸盐的氧化脱羧，得到核酮糖-5-磷酸，二氧化碳和NADPH。在高等植物中，6PGDH具有几种亚细胞定位，包括细胞质，叶绿体，线粒体和过氧化物酶体（Corpas et al。，1998; Krepinsky等人，2001; Mateos et al。，2009;Fernández-Fernándezand Corpas，2016;Hölscher等人，2016）。使用拟南芥作为植物模型和甜椒（Capsicum annuum L.）作为具有农业兴趣的植物的水果，该方案说明如何制备植物提取物用于分离通过在6％聚丙烯酰胺非变性凝胶上电泳可能的6PGDH同种型。因此，该方法允许检测在拟南芥幼苗中的三种6PGDH同种型和甜椒果实中的两种6PGDH同种型。
【背景】非变性凝胶电泳是一种强大的技术，可以分离天然蛋白质。 它们的移动性取决于蛋白质的大小，形状和净电荷。 在这些分析条件下，蛋白质保留了其活性，并结合特定的染色方法，可以分离潜在同种型的存在。 在超氧化物歧化酶家族的情况下，广泛应用这种方法。 然而，据我们所知，没有多少论文分析植物组织中6PGDH活性的不同同工型的存在（Corpas等人，1998; Mateos等人。 ，2009）。 ...
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