| Assays for Oxidative Responses of Fusarium graminearum Strains to Superoxide Radicals
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Author:
Date:
2018-09-05
[Abstract] The ascomycete fungus Fusarium graminearum is a major causal agent of Fusarium head blight (FHB), a devastating disease affecting small grains cereals worldwide. To better understand the pathogenesis of this fungus, we provide here an easy-to-use protocol to examine the sensitivity of the wild-type and mutant strains of F. graminearum to oxidative stress from superoxide anions (O2•-) generated by menadione. Similarly, this assay can also be used to detect other stress responses of different fungal strains to various stress agents. The change in stress response of a mutant can offer a clue for the biological function of mutated genes.
[摘要] 子囊菌真菌 Fusarium graminearum 是 Fusarium 头枯病（FHB）的主要致病因子，FHB是一种影响全世界小粒谷物的破坏性疾病。 为了更好地了解这种真菌的发病机理，我们在此提供了一种易于使用的方案来检测 F的野生型和突变株的敏感性。 禾谷镰刀菌对由甲萘醌产生的超氧阴离子（O2 • - ）的氧化应激。 类似地，该测定也可用于检测不同真菌菌株对各种应激物的其他应激反应。 突变体的应激反应的变化可以为突变基因的生物学功能提供线索。
【背景】子囊菌真菌 Fusarium graminearum （以前也被称为 Gibberella zeae 的性状）不仅是 Fusarium 头枯病和幼苗的主要致病因子小麦和大麦枯萎病，也是玉米赤霉病茎腐病的重要致病因子之一（Dal Bello et al。，2002; Bai and Shaner，2004; Kazan et al。，2012）。除了导致谷物大量减产外，这种真菌还会产生影响人类和动物健康的真菌毒素。因此，这种真菌受到广泛关注，在所有研究的植物病原真菌中排名第四（Dean et al。，2012）。
F。禾本科植物对死有机物进行过冬，特别是对受感染的小粒和玉米作物残留物进行过度研究。为了在如此广泛的环境中生存， F. graminearum ...
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| Enzymatic Activity Assay for Invertase in Synechocystis Cells
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Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract] Invertase can catalyze the hydrolysis of sucrose, and is widely distributed in cells of cyanobacteria and plants. Being responsible for the first step for sucrose metabolism, invertase plays important physiological roles and its enzymatic activity is frequently needed to be determined. All the methods for determination of the invertase activity are dependent on detection of the glucose product generated by the invertase. Here we describe an ion chromatography based protocol of our laboratory for determination of cyanobacterial intracellular invertase activity.
[摘要] 转化酶可催化蔗糖的水解，广泛分布于蓝细菌和植物细胞中。 负责蔗糖代谢的第一步，转化酶起着重要的生理作用，其酶活性经常需要确定。 所有测定转化酶活性的方法都依赖于转化酶产生的葡萄糖产物的检测。 在这里我们描述了我们的实验室用于测定蓝细菌细胞内转化酶活性的基于离子色谱的方案。
【背景】转化酶和蔗糖在蓝细菌中发挥重要的生理作用（Curatti，et al。，2008; Kolman等人，2015）和高等植物（Vargas等人， ，2003; Vargas et。，2010）。转化酶（EC 3.2.1.26）可以催化蔗糖降解成葡萄糖和果糖。由于转化酶的这种特性，任何可用于测定葡萄糖或果糖的方法理论上都将用于转化酶酶活性测定。实际上，大多数转化酶酶活性测定基于检测产生的葡萄糖产物。
一些公司已经开发了用于转化酶活性测定的几种试剂盒，例如来自abcam（USA）的ab197005，来自Novus Biologicals（USA）的KA1629，来自Sigma-Aldrich（USA）的MAK118。通过使用这些试剂盒，由转化酶反应产生的葡萄糖产物将被氧化并通过比色（570nm）或荧光法（λem/ ex = 585 / ...
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| Functional Evaluation of the Signal Peptides of Secreted Proteins
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Author:
Date:
2018-05-05
[Abstract] Here, we describe a method that can be used to evaluate the function of predicted signal peptides. This method utilizes the yeast Saccharomyces cerevisiae YTK12 strain and pSUC2 vector in which the pSUC2 vector with fused predicted signal peptide is transformed into yeast. The function of the signal peptides can be evaluated by using different selective media and color reaction. In this protocol, we provide the detailed description of manipulation in order to implement easily.
[摘要] 在这里，我们描述了一种可用于评估预测信号肽功能的方法。 该方法利用酵母酿酒酵母YTK12菌株和pSUC2载体，其中将具有融合的预测信号肽的pSUC2载体转化到酵母中。 信号肽的功能可以通过使用不同的选择性培养基和显色反应来评估。 在这个协议中，我们提供了操作的详细描述以便轻松实现。
【背景】微生物真核生物，如真菌和卵菌，可以分泌丰富的蛋白质来发挥各种功能。目前，从氨基酸序列预测信号肽的最广泛使用的方法是使用软件SignalP（Petersen等人，2011）。酵母YTK12菌株为转化酶阴性，pSUC2载体含有转化酶基因但缺少甲硫氨酸（Met）和信号肽序列，因此YTK12菌株和pSUC2载体广泛用于肽分泌的生物学评价（Jacobs等人 >，1997; Oh等人，2009）。此外，颜色反应可用于验证结果，因为转化酶的酶活性可以通过将2,3,5-三苯基氯化四唑（TTC）还原成不溶性红色1,3,5-三苯甲forma胺（TPF ）。尽管该方法一般用于评估信号肽的功能，但没有关于该方法的具体和详细的信息（Oh等人，2009; Song等人 >，2015）。在这里，我们描述了一种改进的高效酵母转化方法（Gietz和Schiestl，2007）和详细的方案来评估信号肽的功能，这将是分泌蛋白质研究的主要部分。
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