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Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract] Sheep is a major large animal model for studying development and disease in biomedical research. We utilized CRISPR/Cas9 system successfully to modify multiple genes in sheep. Here we provide a detailed protocol for one-cell-stage embryo manipulation by co-injecting Cas9 mRNA and RNA guides targeting three genes (MSTN, ASIP, and BCO2) to create genetic-modified sheep. Procedure described sgRNA design, construction of gRNA-Cas9 plasmid, efficient detection in fibroblast, embryos and sheep, and some manipulative technologies. Our findings suggested that the CRISPR/Cas9 method can be exploited as a powerful tool for livestock improvement by targeting multiple genes that are in charge of economically significant traits simultaneously.
[摘要] 绵羊是研究生物医学研究发展和疾病的主要大动物模型。 我们成功地利用CRISPR / Cas9系统修改了绵羊中的多个基因。 在这里，我们提供一个细胞阶段胚胎手术的详细协议，通过共同注射针对三个基因的Cas9 mRNA和RNA指南（MSTN ，ASIP 和 BCO2 ）来创建遗传修饰的绵羊。 程序描述了sgRNA设计，gRNA-Cas9质粒的构建，在成纤维细胞，胚胎和绵羊中的有效检测以及一些操纵技术。 我们的研究结果表明，CRISPR / Cas9方法可以作为强大的家畜改良工具，同时针对多个负责经济重要性状的基因。
【背景】锌指核酸酶（ZFN）和转录激活物样效应核酸酶（TALENs）已被用于修改过去许多细胞系和生物体。 最近的CRISPR / Cas（集群定期间隔短回文重复/ CRISPR相关）技术开发为靶基因座的基因组修饰提供了有效的工具。 该系统具有同时修改多个基因座的优点。 具有特定基因修饰的绵羊可能有助于育种。 结果表明羊的大动物修饰的第一个详细的证据。
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