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Author:
Regin Rønn, Xiuli Hao, Freja Lüthje, Nadezhda A. German, Xuanji Li, Fuyi Huang, Javan Kisaka, David Huffman, Hend A. Alwathnani, Yong-Guan Zhu and Christopher Rensing,
Date:
2017-07-05
[Abstract] We performed an assay to test the ability of different E. coli strains to survive inside amoebal cells after ingestion. In the assay we incubated bacteria together with cells of Dictyostelium discoideum for six hours. After co-incubation most of the uningested bacteria were removed by centrifugation and the remaining uningested bacteria were killed by gentamicin. Gentamicin is used because it does not penetrate into eukaryotic cells allowing the ingested bacteria to survive the antibiotic treatment, whereas bacteria outside the amoebal cells are killed.
[摘要] 我们进行了一个测试来测试不同E的能力。 大肠杆菌菌株在摄入后在变形细胞内存活。 在测定中，我们将细菌与迪氏底盘藻细胞一起培养6小时。 共培养后，通过离心除去大部分未染色的细菌，剩余的未染色细菌被庆大霉素杀死。 使用庆大霉素，因为它不会渗透到真核细胞中，允许摄取的细菌在抗生素治疗中存活，而在变形细胞外的细菌被杀死。
【背景】细菌已经发展了几种不同的策略来避免或抵抗原生动物的捕食（Rønn等人，2012）。减少摄入机会，如增加细胞大小，聚集，生物膜形成和增加游泳速度的机制有充分的记录（Matz和Kjelleberg，2005;Rønn等人，2012），而机制允许细菌摄入后原生动物食物空泡中抵抗消化较少研究（龚等人，2016）。在这里，我们描述了一种方法来研究细菌菌株在通过社会变形虫的盘根盘菌摄入后存活的能力。我们使用这种测定法来研究铜是否耐药。大肠杆菌摄入后的生存机会比没有铜抗性的细菌更高（郝等，2016）。我们研究了铜电阻，因为已知巨噬细胞是在脊椎动物的免疫系统中具有重要作用的吞噬细胞，使用铜来杀死吞噬细胞中的细菌（Hodgkinson和Petris，2012）。我们假设这种杀伤机制最初是在多细胞生命发生之前自由生存的原生动物中发生的，因此铜抗性可能是保护细菌免受原生动物捕食的一个因素。
该测定法是用于评估巨噬细胞杀死细菌的能力的庆大霉素保护测定的修饰（参见例如，，Kaneko等人，2016），并且它利用庆大霉素不能渗入真核细胞。在原始测定中，在两个时间点确定巨噬细胞中的内化细菌细胞的数量。首先，将巨噬细胞与细菌一起培养给定的时间段，并且在这种共培养之后，去除未经检测的细菌并估计内化细菌的数量。巨噬细胞在没有细胞外细菌的情况下进行第二次测量，以使其消化内源性细菌。这两个估计之间的比率是细菌存活率的量度。 ...
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