| Assaying Glycogen and Trehalose in Yeast
|
|
Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract] Organisms store carbohydrates in several forms. In yeast, carbohydrates are stored in glycogen (a multi-branched polysaccharide) and in trehalose (a disaccharide). As in other organisms, the amount of stored carbohydrate varies dramatically with physiological state, and accordingly, an assay of stored carbohydrate can help reveal physiological state. Here, we describe relatively easy and streamlined assays for glycogen and trehalose in yeast that can be applied either to a few samples, or in a moderately high-throughput fashion (dozens to hundreds of samples).
[摘要] 生物体以多种形式储存碳水化合物。 在酵母中，碳水化合物储存在糖原（多支链多糖）和海藻糖（二糖）中。 如在其他生物体中，存储的碳水化合物的量与生理状态显着变化，因此，存储的碳水化合物的测定可以帮助揭示生理状态。 在这里，我们描述了酵母中糖原和海藻糖的相对容易和流线型的测定法，其可以应用于少量样品，或以适度高通量的方式（几十至几百个样品）。
【背景】糖原和海藻糖是酵母和许多其他生物的两种储存碳水化合物。在酵母中，当培养基开始耗尽并且细胞生长速率降低时，这两种储存碳水化合物都会积累。测定酵母中存储碳水化合物的方法可追溯到至少1956年（Trevelyan和Harrison，1956a和1956b），并且自（例如，Becker，1978; Quain，1981; Schulze ，1995; Parrou和Francois，1997; Plata等人，2013）等）。测定这两种储存碳水化合物有三个基本步骤：首先，裂解或渗透细胞;第二，从糖原或海藻糖释放葡萄糖;第三，测定所得葡萄糖。
细胞可以机械裂解（Schulze等人，1995），但这不可避免地有点乏味和耗时，并且往往需要更多的细胞。细胞可以被碱渗透，但是糖原形成大的多支化颗粒，并且难以提取，因此一些方案既使用碱和酸提取（Trevelyan和Harrison，1956a和1956b; ...
|
|
|
| Endpoint or Kinetic Measurement of Hydrogen Sulfide Production Capacity in Tissue Extracts
|
|
Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract] Hydrogen sulfide (H2S) gas is produced in cells and tissues via various enzymatic processes. H2S is an important signaling molecule in numerous biological processes, and deficiencies in endogenous H2S production are linked to cardiovascular and other health complications. Quantitation of steady-state H2S levels is challenging due to volatility of the gas and the need for specialized equipment. However, the capacity of an organ or tissue extract to produce H2S under optimized reaction conditions can be measured by a number of current assays that vary in sensitivity, specificity and throughput capacity. We developed a rapid, inexpensive, specific and relatively high-throughput method for quantitative detection of H2S ...
[摘要] 通过各种酶法在细胞和组织中产生硫化氢（H 2 S）。 H 2 S是许多生物过程中重要的信号分子，内源性H 2 S生产的缺陷与心血管和其他健康并发症有关。稳态H 2 S水平的定量是由于气体的挥发性和专门设备的需要而具有挑战性的。然而，器官或组织提取物在优化的反应条件下产生H 2 S的能力可以通过许多灵敏度，特异性和通过能力变化的现有测定来测量。我们开发了用于从生物组织定量检测H 2 S生产能力的快速，廉价，特异性和相对高通量的方法。释放到生物样品上方的头部空间中的H 2 S 2与乙酸铅反应形成硫化铅，其使用平板阅读器或作为终点测定法连续测量。
【背景】通过哺乳动物（CGL，CBS，3-MST）中的至少三种不同的酶以一定范围的组织和细胞类型分布内源性地产生硫化氢（H 2 S）。 H 2 S作为与代谢相关的广泛生物学功能的气体发射器和效应分子（Wang，2012）起作用（Módiset al。，2013），应力抵抗（Hine等人，2015）和氧化还原生物学（Dickhout et al。，2012）。减少的H 2 S与心血管问题有关，包括啮齿动物中的高血压（Yang等人，2008）和人心脏肥大（Polhemus等人， ，2014）。增加的H 2 S也可引起病理学，例如啮齿动物胰腺炎（Bhatia et al。，2005）。因此，从生物来源准确和定量地检测H 2 ...
|
|
|