Preparation, Stimulation and Other Uses of Adult Rat Brain Synaptosomes
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Author:
Date:
2017-12-20
[Abstract] In this paper, our protocol for preparation of brain synaptosomes is described. Synaptosomes are a valuable model system for analysis of structural components of the synapse as well as for investigation of synaptic function. Synaptosomal preparations are necessary for understanding molecular changes at synapses where critical post-translational modifications of synaptic proteins may occur. Not only are synaptosomes rich in synaptic proteins, but they can be used for analyzing uptake of neurotransmitters into synaptic vesicles and for analysis of the involvement of neurotransmitter synthesis and release. Synaptosomes can be stimulated with increased calcium influx to release neurotransmitters. Synaptosomal preparations have been used in characterizing calcium dependent phosphorylation and ...
[摘要] 在这篇论文中,我们描述了制备脑突触体的方案。突触体是用于分析突触的结构组分以及用于调查突触功能的有价值的模型系统。突触体制备对于理解可能发生突触蛋白的关键翻译后修饰的突触处的分子变化是必需的。突触小体不仅含有丰富的突触蛋白,还可用于分析神经递质向突触小泡的摄取和神经递质合成和释放的参与分析。可以用增加的钙内流刺激突触体释放神经递质。突触体制剂已被用于表征钙依赖性磷酸化和GABA合成酶GAD65(分子量为65kDa的L-谷氨酸脱羧酶)的活化。通过检查从突触体制剂获得的突触小泡膜上的蛋白质复合物,可以表征GAD65在GABA囊泡释放的偶联合成和囊泡摄取中的作用,这最终导致GABA囊泡释放GABA能神经传递的微调方法。
【背景】突触体制备方法在40多年前在神经科学研究实验室中建立,并且在涉及神经递质释放相关的细胞外钾升高以及对细胞内钙增加的应答方面具有极大的价值。除了阐明神经递质释放的过程之外,突触体制剂已经成为突触囊泡的有价值的来源。关于突触小泡的研究已经被用于表征参与偶联的神经递质合成和囊泡释放的蛋白质组分。突触体制剂作为突触囊泡分离的中间体也是非常有价值的,然后根据位于包含神经递质合成酶的囊泡膜上的蛋白质复合物进行分析。在这方面关键的意义在于包括CSP(胱氨酸 - ...
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Endpoint or Kinetic Measurement of Hydrogen Sulfide Production Capacity in Tissue Extracts
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Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract] Hydrogen sulfide (H2S) gas is produced in cells and tissues via various enzymatic processes. H2S is an important signaling molecule in numerous biological processes, and deficiencies in endogenous H2S production are linked to cardiovascular and other health complications. Quantitation of steady-state H2S levels is challenging due to volatility of the gas and the need for specialized equipment. However, the capacity of an organ or tissue extract to produce H2S under optimized reaction conditions can be measured by a number of current assays that vary in sensitivity, specificity and throughput capacity. We developed a rapid, inexpensive, specific and relatively high-throughput method for quantitative detection of H2S ...
[摘要] 通过各种酶法在细胞和组织中产生硫化氢(H 2 S)。 H 2 S是许多生物过程中重要的信号分子,内源性H 2 S生产的缺陷与心血管和其他健康并发症有关。稳态H 2 S水平的定量是由于气体的挥发性和专门设备的需要而具有挑战性的。然而,器官或组织提取物在优化的反应条件下产生H 2 S的能力可以通过许多灵敏度,特异性和通过能力变化的现有测定来测量。我们开发了用于从生物组织定量检测H 2 S生产能力的快速,廉价,特异性和相对高通量的方法。释放到生物样品上方的头部空间中的H 2 S 2与乙酸铅反应形成硫化铅,其使用平板阅读器或作为终点测定法连续测量。 【背景】通过哺乳动物(CGL,CBS,3-MST)中的至少三种不同的酶以一定范围的组织和细胞类型分布内源性地产生硫化氢(H 2 S)。 H 2 S作为与代谢相关的广泛生物学功能的气体发射器和效应分子(Wang,2012)起作用(Módiset al。,2013),应力抵抗(Hine等人,2015)和氧化还原生物学(Dickhout et al。,2012)。减少的H 2 S与心血管问题有关,包括啮齿动物中的高血压(Yang等人,2008)和人心脏肥大(Polhemus等人, ,2014)。增加的H 2 S也可引起病理学,例如啮齿动物胰腺炎(Bhatia et al。,2005)。因此,从生物来源准确和定量地检测H 2 ...
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