| Macrophage Survival Assay Using High Content Microscopy
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Author:
Date:
2017-08-20
[Abstract] Macrophages maintain tissue homoeostasis by regulating inflammation and tissue repair mechanisms. Thus, the fate of macrophages has an impact on the state of the tissue. The aim of this protocol is to quantify macrophage survival using high content microscopy and image processing software. Here, we describe a high-content image based protocol to assess the effect of diverse stimuli in combination with pharmacological treatments on macrophage survival in a quantitative, unbiased and high-throughput manner.
[摘要] 巨噬细胞通过调节炎症和组织修复机制来维持组织均匀平衡。 因此，巨噬细胞的命运对组织的状态有影响。 该方案的目的是使用高含量显微镜和图像处理软件来量化巨噬细胞存活。 在这里，我们描述了一种基于高含量图像的方案，以定量，无偏差和高通量方式评估不同刺激与药理学治疗对巨噬细胞存活的影响。
【背景】巨噬细胞是吞噬先天免疫细胞，是组织炎症的主要驱动因素（Medzhitov，2008）。 这些细胞与自身免疫，自身炎症，感染性，神经变性和代谢性疾病一起与癌症相关（Ginhoux和Jung，2014）。 在这种情况下，巨噬细胞在炎症中的作用得到了很好的研究，然而，非传染性和感染性疾病中巨噬细胞存活的影响在很大程度上是未知的。 我们的研究表明，某些病原体相关受体（PRR）的激活可以诱导巨噬细胞存活（Eren等，2016）。 我们描述了一种分子机制，证明专门的细胞内病原体如何利用PRR诱导的细胞存活（Eren等，2016）。 因此，需要进一步的研究来了解巨噬细胞存活在不同疾病环境中的作用。
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| Formaldehyde Fixation of Extracellular Matrix Protein Layers for Enhanced Primary Cell Growth
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Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract] Coating tissue culture vessels with the components of the extracellular matrix such as fibronectin and collagens provides a more natural environment for primary cells in vitro and stimulates their proliferation. However, the effects of such protein layers are usually rather modest, which might be explained by the loss immobilized proteins due to their weak non-covalent association with the tissue culture plastic. Here we describe a simple protocol for a controlled fixation of fibronectin, vitronectin and collagen IV layers by formaldehyde, which substantially enhances the stimulation of primary cell proliferation by these extracellular proteins.
[摘要] 用诸如纤连蛋白和胶原的细胞外基质的组分涂覆组织培养容器为体外原代细胞提供更自然的环境并刺激它们的增殖。 然而，这种蛋白质层的作用通常相当适中，这可能由于与组织培养塑料的非共价结合弱而被固定蛋白质损失所解释。 在这里我们描述一个简单的协议，通过甲醛控制纤维连接蛋白，玻连蛋白和胶原IV层的固定，这大大增强了这些细胞外蛋白对原代细胞增殖的刺激。
【背景】细胞外基质（ECM）如纤连蛋白，层粘连蛋白，玻连蛋白和胶原蛋白的组分通常用于包被组织培养容器，因为它们为体外原代细胞提供更自然的环境并刺激它们的增殖（ Sawada等人，1987; ...
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