| Immuno-electrophysiology on Neuromuscular Junctions of Drosophila Third Instar Larva
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Author:
Date:
2021-02-05
[Abstract] Alterations in synaptic transmission are critical early events in neuromuscular disorders. However, reliable methodologies to analyze the functional organization of the neuromuscular synapses are still needed. This manuscript provides a detailed protocol to analyze the molecular assembly of the neuromuscular synapses through immune-electrophysiology in Drosophila melanogaster. This technique allows the quantification of the molecular behavior of the neuromuscular synapses by correlating the structural configuration of the synaptic boutons with their electrical activity.
[摘要] [摘要]突触传递的改变是神经肌肉疾病的关键早期事件。但是，仍然需要可靠的方法来分析神经肌肉突触的功能组织。此马努脚本提供了详细的协议，通过在免疫电分析神经肌肉突触的分子组装果蝇黑腹果蝇。该技术通过使突触钮扣的结构构型与其电活动相关联，可以量化神经肌肉突触的分子行为。
[背景]果蝇三龄幼虫的神经肌肉接头（NMJ）的功能组织在研究突触形成和功能的分子机制方面具有突出的优势（Feiguin等，2009 ; Godena等，2011; Romano等。（2014年和2015年；Strah等人，2020年），它在包括人类在内的其他物种中似乎是保守的。在这方面，果蝇NMJs的解剖组织是由多个突触钮扣构成的，这些突触钮扣是在运动轴突的最终乔木形成的。这些结构的分化和维持负责骨骼肌的神经支配，并暗示不同分子的协调作用，专门用于建立细胞接触以及释放，接收和整合神经递质信号传导所需的机制。此外，在果蝇中开发的功能强大的遗传工具以及神经系统对单个神经元的解剖学解析，提供了难得的机会，可以在可区分细胞的组织中进行全基因组范围的分子表型无偏搜索。尽管果蝇已经存在可视化神经肌肉突触建立的单独协议（Sabeva和Bykhovskaia，2017 ; Goel等人，2019 ...
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| Validating Candidate Congenital Heart Disease Genes in Drosophila
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Author:
Date:
2017-06-20
[Abstract] Genomic sequencing efforts can implicate large numbers of genes and de novo mutations as potential disease risk factors. A high throughput in vivo model system to validate candidate gene association with pathology is therefore useful. We present such a system employing Drosophila to validate candidate congenital heart disease (CHD) genes. The protocols exploit comprehensive libraries of UAS-GeneX-RNAi fly strains that when crossed into a 4XHand-Gal4 genetic background afford highly efficient cardiac-specific knockdown of endogenous fly orthologs of human genes. A panel of quantitative assays evaluates phenotypic severity across multiple cardiac parameters. These include developmental lethality, larva and adult heart morphology, and adult longevity. These ...
[摘要] 基因组测序工作可能涉及大量基因和从头突变作为潜在的疾病风险因素。 因此，用于验证候选基因与病理学关联的高通量体内模型系统是有用的。 我们提出了使用果蝇来验证候选先天性心脏病（CHD）基因的这种系统。 这些方案利用了UAS-GeneX-RNAi飞行菌株的综合文库，当跨越4XHand-Gal4遗传背景时，提供了人类基因内源性直向同源物的高效心脏特异性敲低。 一组定量测定评估多种心脏参数的表型严重程度。 这些包括发育致死率，幼虫和成人心脏形态以及成年人的长寿。 这些方案最近被用于评估患者全外显子测序所涉及的100多个候选CHD基因（Zhu等，2017）。
【背景】（Bier和Bodmer，2004; Cagan，2011; Zhang et al。，2013; Owusu-Ansah和Perrimon，2014; Diop和Bodmer，2015; Na et al。等等，2015），75％的人类疾病相关基因由飞行基因组中的功能同系物表示（Reiter et al。，2001）。尽管将果蝇发育表型直接与患者症状联系起来是一个挑战，果蝇可以作为一个非常复杂和有效的平台来测试和验证候选疾病基因功能在开发中，这可以很容易地扩大到评估大量的候选基因从患者基因组测序工作中确定。基于进化保守的心脏发育遗传机制，果蝇已被用于研究与冠心病相关20多年的基因（Bier和Bodmer，2004; ...
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