| Assessing Plant Tolerance to Acute Heat Stress
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Author:
Date:
2017-07-20
[Abstract] It is well-established that plants are able to acclimate to temperatures above or below the optimal temperature for their growth. Here, we provide protocols for assays that can be used quantitatively or qualitatively to assess the relative ability of plants to acquire tolerance to high temperature stress. The hypocotyl elongation assay described was developed to screen for mutants defective in the acquisition of tolerance to extreme temperature stress, and other assays were developed to further characterize mutant and transgenic plants for heat tolerance of other processes or at other growth stages. Although the protocols provide details for application to Arabidopsis thaliana, the same basic methods can be adopted to assay heat tolerance in other plant species.
[摘要] 植物能够适应温度高于或低于最佳温度以达到其生长的目的是确定的。 在这里，我们提供可用于定量或定性评估植物获得耐高温胁迫耐受性的相对能力的测定方案。 开发了描述的下胚轴延伸测定以筛选获得对极端温度胁迫的耐受性的缺陷突变体，并且开发了其他测定以进一步表征突变体和转基因植物用于其它过程的耐热性或在其它生长阶段。 虽然方案提供了应用于拟南芥的细节，但是可以采用相同的基本方法来测定其他植物物种的耐热性。
【背景】植物能够适应温度高于或低于其最佳温度以达到其生长的目的已经确定，许多研究已经确定了与温度适应有关的基因。通常，适应需要暴露于非破坏性温度处理的时期，要么超过最佳以诱导耐热性，要么低于最佳诱导感冒或冷冻耐受性。在拟南芥和其他植物中，冷冻耐受性可以在冷处理（冷硬化）的24小时期内实现，在几天硬化后发生最大的冷冻耐受性（Gilmour等人，1988; Thomashow，1999）。在几个小时内，对正常致命或破坏性高温的耐受性可以更快地发展。这种类型的快速驯化被Yarwood（1967）和其他人在20世纪60年代使用各种植物物种进行了广泛的记录。高温适应性研究在20世纪80年代早期得到认可时加速，包括植物在内的所有生物体都受到热应激的反应，“热休克反应”涉及转录和翻译一组保守的“热休克蛋白”（Lindquist， 1986; ...
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| Validating Candidate Congenital Heart Disease Genes in Drosophila
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Author:
Date:
2017-06-20
[Abstract] Genomic sequencing efforts can implicate large numbers of genes and de novo mutations as potential disease risk factors. A high throughput in vivo model system to validate candidate gene association with pathology is therefore useful. We present such a system employing Drosophila to validate candidate congenital heart disease (CHD) genes. The protocols exploit comprehensive libraries of UAS-GeneX-RNAi fly strains that when crossed into a 4XHand-Gal4 genetic background afford highly efficient cardiac-specific knockdown of endogenous fly orthologs of human genes. A panel of quantitative assays evaluates phenotypic severity across multiple cardiac parameters. These include developmental lethality, larva and adult heart morphology, and adult longevity. These ...
[摘要] 基因组测序工作可能涉及大量基因和从头突变作为潜在的疾病风险因素。 因此，用于验证候选基因与病理学关联的高通量体内模型系统是有用的。 我们提出了使用果蝇来验证候选先天性心脏病（CHD）基因的这种系统。 这些方案利用了UAS-GeneX-RNAi飞行菌株的综合文库，当跨越4XHand-Gal4遗传背景时，提供了人类基因内源性直向同源物的高效心脏特异性敲低。 一组定量测定评估多种心脏参数的表型严重程度。 这些包括发育致死率，幼虫和成人心脏形态以及成年人的长寿。 这些方案最近被用于评估患者全外显子测序所涉及的100多个候选CHD基因（Zhu等，2017）。
【背景】（Bier和Bodmer，2004; Cagan，2011; Zhang et al。，2013; Owusu-Ansah和Perrimon，2014; Diop和Bodmer，2015; Na et al。等等，2015），75％的人类疾病相关基因由飞行基因组中的功能同系物表示（Reiter et al。，2001）。尽管将果蝇发育表型直接与患者症状联系起来是一个挑战，果蝇可以作为一个非常复杂和有效的平台来测试和验证候选疾病基因功能在开发中，这可以很容易地扩大到评估大量的候选基因从患者基因组测序工作中确定。基于进化保守的心脏发育遗传机制，果蝇已被用于研究与冠心病相关20多年的基因（Bier和Bodmer，2004; ...
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