| Plate Assay to Determine Caenorhabditis elegans Response to Water Soluble and Volatile Chemicals
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Author:
Date:
2018-02-20
[Abstract] The nematode Caenorhabditis elegans is widely used for behavioral studies ranging from simple chemosensation to associative learning and memory. It is vital for such studies to determine optimal concentrations of attractive and aversive chemicals that C. elegans can sense. Here we describe a resource localization assay in which a chemical compound of interest is placed in two compartments of a quadrant plate in order to determine optimal concentrations of the chemical in behavioral studies. Using the assay, we determined the optimal concentration of a water-soluble attractant, KCl, as an unconditioned stimulus for the study of associative learning and memory. In this protocol, we also describe a chemotaxis assay using a square agar plate spotted with an aversive ...
[摘要] 线虫<秀秀隐杆线虫广泛用于从简单的化学感应到联想学习和记忆的行为研究。 这些研究对于确定吸引和厌恶化学物质的最佳浓度至关重要。="" 线虫可以感觉到。="" 在这里我们描述了一种资源定位测定法，其中将感兴趣的化学化合物置于象限板的两个隔室中以确定化学品在行为研究中的最佳浓度。="" 使用该测定，我们确定了水溶性引诱剂kcl的最佳浓度，作为研究关联学习和记忆的无条件刺激。="">
【背景】线虫线虫广泛用作动物行为研究的模式生物。 ℃。秀丽隐杆线虫感知主要由最大的化学感受器官（Ward，1973; Dusenbery，1974; Bargmann和Horvitz，1991; Bargmann等人）等介导的各种水溶性和挥发性化学物质。 1993）。行为研究必须确定可以被感知的化学物质的精确浓度。线虫。为了确定用于C的水溶性引诱剂的最佳浓度。线虫，Wicks等人（2000）使用象限琼脂平板进行行为测定，其中感兴趣的化学物质与琼脂在两个隔室中混合，并且该测定已广泛用于许多化学品（例如Jansen等人，2002; Ortiz等人，2009; Murayama和Maruyama，2013; Sassa＆lt; em＆gt; et al。，2013）。趋化性分析也被用于测量C的敏感性。 ...
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| Targeted Mutagenesis Using RNA-guided Endonucleases in Mosses
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Author:
Date:
2017-06-20
[Abstract] RNA-guided endonucleases (RGENs) have been used for genome editing in various organisms. Here, we demonstrate a simple method for performing targeted mutagenesis and genotyping in a model moss species, Physcomitrella patens, using RGENs. We also performed targeted mutagenesis in a non-model moss, Scopelophilla cataractae, using a similar method (Nomura et al., 2016), indicating that this experimental system could be applied to a wide range of mosses species.
[摘要] RNA引导的核酸内切酶（RGENs）已被用于各种生物体的基因组编辑。 在这里，我们展示了使用RGENs在模型苔藓种类小立碗藓中进行定向诱变和基因分型的简单方法。 我们还使用类似的方法（Nomura等，2016）在非模型苔藓，Scopelophilla白内障中进行了定向诱变，表明该实验系统可以应用于广泛的苔藓物种。
【背景】使用来自适应性免疫系统的RNA引导内切核酸酶（RGEN）的靶向诱变，使用细菌CRISPR（定期间隔的回文重复序列）/ Cas（CRISPR相关）系统近年来已经急剧发展。在该方法中，使用源自化脓性链球菌的Cas9核酸内切酶和人工设计的单链导向RNA（sgRNA）。 Cas9-sgRNA复合物识别原始相邻基序（5'-NGG-3'），并在目标位点上游3 bp切割（Jinek等，2012）。随后，在DNA的双链断裂（DSB）修复过程中发生随机插入和/或缺失突变。使用这些RGEN的定向诱变是有效的以及成本和时间有效的，它已被用于各种生物体（包括许多植物物种）的基因组编辑。在这里，我们在青苔中建立了使用RGEN进行靶向诱变的方案，并在模型和非模型物种中进行了证明（Nomura等，2016）。
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