|
Author:
Date:
2017-06-20
[Abstract] DNA polymerase θ (Polθ) is a promiscuous enzyme that is essential for the error-prone DNA double-strand break (DSB) repair pathway called alternative end-joining (alt-EJ). During this form of DSB repair, Polθ performs terminal transferase activity at the 3’ termini of resected DSBs via templated and non-templated nucleotide addition cycles. Since human Polθ is able to modify the 3’ terminal ends of both DNA and RNA with a wide array of large and diverse ribonucleotide and deoxyribonucleotide analogs, its terminal transferase activity is more useful for biotechnology applications than terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT). Here, we present in detail simple methods by which purified human Polθ is utilized to modify the 3’ terminal ends of RNA and DNA for various applications in ...
[摘要] DNA聚合酶θ（Polθ）是一种混杂的酶，对易错的DNA双链断裂（DSB）修复途径而言是必需的，称为替代性末端连接（alt-EJ）。 在这种形式的DSB修复中，Polθ通过模板和非模板核苷酸添加循环在切割的DSB的3'末端处进行末端转移酶活性。 由于人Polθ能够用广泛的多种核糖核苷酸和脱氧核糖核苷酸类似物修饰DNA和RNA的3'末端，因此其末端转移酶活性对于生物技术应用比末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）更有用。 在这里，我们详细介绍使用纯化的人Polθ修饰生物技术和生物医学研究中各种应用的RNA和DNA的3'末端的简单方法。
【背景】人类POLQ基因编码含有N末端超家族2（SF2）型解旋酶结构域和C末端A家族聚合酶结构域的大蛋白质（Sfeir和Symington，2015; Black et al。，2016; Wood and Doublie， 2016）。蛋白质也编码一个大的中心结构域，其功能尚未归入。 Polθ在后生动物中表达，已被证明在DNA复制和修复的多个方面起作用（Black et al。，2016; Wood and Doublie，2016）。最近的工作表明，哺乳动物Polθ对于易于识别的DNA双链断裂（DSB）修复途径而言是必需的，称为替代性末端连接（alt-EJ），也称微小鼠介导的终结合（MMEJ）（Yousefzadeh et al。 ，2014; ...
|