| Culturing Bacteria from Caenorhabditis elegans Gut to Assess Colonization Proficiency
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Author:
Date:
2017-06-20
[Abstract] Determining an accurate count of intestinal bacteria from Caenorhabditis elegans is one critical way to assess colonization proficiency by a given bacteria. This can be accomplished by culturing appropriate dilutions of worm gut bacteria on selective or differential agarized media. Because of the high concentration of bacteria in gut worm, dilution is necessary before plating onto growth media. Serial dilutions can reduce the concentration of the original intestinal sample to levels low enough for single colonies to be grown on media plates, allowing for the calculation of the initial counts of bacteria in the intestinal sample.
[摘要] 从秀丽隐杆线虫确定肠道细菌的准确计数是评估给定细菌的定殖能力的关键方法之一。 这可以通过在选择性或差异琼脂培养基上培养适当稀释的蠕虫细菌来实现。 由于肠蠕虫中细菌的浓度高，因此稀释必须在生长培养基上。 连续稀释可以将原始肠样品的浓度降低到足够低的浓度，使单个菌落生长在培养基平板上，从而计算肠样品中细菌的初始计数。
【背景】动物很少分离生活，但与微生物有关。主要与微生物之间的共生关系是Rosentberg和Zilber-Rosenberg在2011年的共生关系。在哺乳动物中，宿主 - 微生物共生相互作用主要发生在粘膜表面，最重要的是肠粘膜。当从野生新鲜分离时，线虫通常在其肠腔内容纳多种细菌菌群，使人联想到高等生物的微生物群落（Duveau和Felix，2012; Bumbarger等，2013）。相比之下，在实验室中，秀丽隐杆线虫通常保持在单一细菌菌株的存在下（Brenner，1974）。大多数情况下，这是革兰氏阴性细菌大肠杆菌。然而，有时使用其他物种，例如革兰氏阳性枯草芽孢杆菌（Garsin等，2003）。成虫蠕虫含有大约10,000个细菌细胞，比宿主蠕虫体细胞数量高10倍（Portal-Celhay和Blaser，2012）：或许巧合的是，这种微生物群与宿主细胞的比例与人类发现的相似。
正在使用不同的策略来测量秀丽隐杆线虫的细菌如异硫氰酸荧光素（FITC）标记的细菌，表达融合报告基因的细菌（绿色荧光蛋白[GFP]或β-半乳糖苷酶））的定殖能力。然而，更准确的方法是测量从蠕虫肠分离出的CFU的数量。在本协议中，我们展示了如何分离和计数秀丽隐杆线虫的大肠杆菌和枯草芽孢杆菌菌株。在枯草芽孢杆菌的情况下，我们还展示了如何区分营养形式与秀丽隐杆线虫内部这种细菌形成的高度抗性孢子。 ...
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| Soft Agar Colony Formation Assay as a Hallmark of Carcinogenesis
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Author:
Date:
2017-06-20
[Abstract] Soft agar colony formation assay is established to estimate the anchorage-independent growth ability of cells. In this assay, a bottom layer of agar with complete media is poured and solidified first, followed by an upper layer containing a specified number of cells suspended in medium-agar mixture. After two weeks of incubation, the number of colonies will be counted, serving as an indicator of malignancy of tumor cells.
[摘要] 建立软琼脂集落形成测定法来估计细胞的锚定依赖性生长能力。 在该测定中，首先将具有完全培养基的琼脂的底层倾倒并固化，然后将含有特定数量的悬浮于中等琼脂混合物中的细胞的上层。 孵化两周后，将计数菌落数，作为肿瘤细胞恶性肿瘤的指标。
【背景】无固定生长是细胞在固体表面独立生长的能力，被认为是致癌作用的标志（de Larco和Todaro，1978）。软琼脂集落形成测定是评估细胞粘附非依赖性生长以检测恶性细胞的致瘤性潜力的良好方法（Roberts等人，1985），其由Puck等人描述的板集落形成测定。在1956年，细胞接种到培养板上以测定细胞形成菌落的能力（Puck等，1956）。板集落形成测定的局限性在于它仅显示针对锚定依赖性生长的细胞能力，正常细胞可以从其脱离（一种在锚定依赖性细胞脱离周围的细胞外基质时发生的程序性细胞死亡形式）并生存（Taddei等，2012）。相比之下，恶性细胞能够不附着于底物而增殖和生长。因此，开发了软琼脂集落形成测定法来表征体外这种能力（Hamburger and Salmon，1977; Yuan et al。，2017）。软琼脂集落形成实验广泛适用于细胞分化，转化和肿瘤发生的研究以及抗肿瘤治疗的疗效评价。
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