| Protease Activity Assay in Fly Intestines
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Author:
Date:
2017-09-20
[Abstract] The intestine is a central organ required for the digestion of food, the absorption of nutrients and for fighting against aggressors ingested along with the food. Impairment of gut physiology following mucosal damages impacts its digestive capacities that consequently will affect growth, wellbeing or even survival of the individual. Hence, the assessment of intestinal functions encompasses, among others, the monitoring of its integrity, its cellular renewing, its immune defenses, the production of enteroendocrine hormones and its digestive capacities. Here, we describe in detail how to assess the activity of the proteases secreted in the intestinal lumen of adult Drosophila melanogaster flies. This method can also be used for larval intestines. The present protocol is adapted and ...
[摘要] 肠是消化食物所需的中枢器官，吸收营养物质，并与食物一起摄入的侵略者作斗争。 粘膜损伤后的肠道生理损伤影响其消化能力，从而影响个体的生长，健康甚至生存。 因此，肠功能的评估包括监测其完整性，细胞更新，免疫防御，肠内分泌激素的产生及其消化能力。 在这里，我们详细描述如何评估分泌在成年果蝇的肠腔中的蛋白酶的活性。 这种方法也可以用于幼虫肠。 本协议由“蛋白酶荧光检测试剂盒”（产品代码PF0100）中提出的Sigma-Aldrich公司的方案进行了改进和改进。
【背景】肠道受到诸如斋戒，禁食，化学物质，病原体，损伤等诸多压力的影响。肠道能够通过保持其体内平衡的生理平衡来克服这种压力。为了感知进入的压力并产生适应性的维持肠功能的答案，肠已经开发出强健和保守的机制，如局部先天免疫防御和组织再生（Royet和Charroux，2013; Bonfini等，2016）。然而，在某些情况下，肠道稳态的维持可能受到影响。例如，在老化期间，随着许多未成熟或分化不良的细胞的存在，组织稳态维持总体下降（Jasper，2015; ...
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| Analysis of 3D Cellular Organization of Fixed Plant Tissues Using a User-guided Platform for Image Segmentation
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Author:
Date:
2017-06-20
[Abstract] The advent of non-invasive, high-resolution microscopy imaging techniques and computational pipelines for high-throughput image processing has contributed to gain insights in plant organ morphogenesis at the cellular level. Confocal scanning laser microscopy (CSLM) allows the generation of three dimensional images constituted of serial optical sections reporting on stained subcellular structures. Fluorescent labels of cell walls or cell membranes, either chemically or through reporter proteins, are particularly useful for the analyses of tissue organization and cellular shapes in 3D. Image segmentation based on cell boundary signals is used as an input to generate 3D-segments representing cells. These digitalized, 3D objects provide quantitative data on cell shape, size, geometry, ...
[摘要] 非侵入性，高分辨率显微镜成像技术和高通量图像处理计算管道的出现有助于在细胞水平上获得植物器官形态发生的见解。共焦扫描激光显微镜（CSLM）允许产生由串联光学部件组成的三维图像，其报告染色的亚细胞结构。细胞壁或细胞膜的化学或通过报告蛋白的荧光标记对于3D中组织组织和细胞形状的分析特别有用。基于单元边界信号的图像分割被用作生成表示单元的3D段的输入。如果使用其他记录器，这些数字化3D对象提供有关细胞形状，大小，几何形状，位置或（细胞间）强度信号的定量数据。在这里，我们报告使用微观数据的图像分割的详细的注释工作流程。我们在拟南芥胚珠原基发育过程中对组织图案进行了研究。使用修改的假希夫碘化丙啶（mPS-PI）协议将整个心皮染色为细胞边界，通过CSLM以高分辨率获得3D图像，使用ImarisCell对单个细胞类型进行分段和注释。这允许与组织动力学研究相关的细胞形状和细胞数量的定量分析。
【背景】植物器官和组织动力学研究依赖于沿着发育进程的三维生长过程的分析。细胞数量，细胞大小和细胞形态的演变允许分别解释增殖，细胞扩增和各向异性的事件（Roeder等，2011; Barbier de Reuille等，2015; Bassel和Smith，2016; Coen和Rebocho， ...
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