| Generation and in Planta Functional Analysis of Potato Virus Y mutants
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Author:
Date:
2020-07-20
[Abstract] Potato virus Y (PVY), the type member of the genus Potyvirus (family Potyviridae), is the most widespread virus affecting potato and is included in the top five most economically detrimental plant viruses. Recently, the structure of the PVY virion has been determined by cryo-electron microscopy, which has opened the doors to functional studies that explore the involvement of selected amino acids in different stages of the viral cycle. The only way to functionally challenge in planta the role of particular amino acids in the coat protein of PVY, or in other viral proteins, is by using cDNA clones. The use and manipulation of PVY cDNA clones, unlike those of other potyviruses, has been traditionally impaired by the toxicity that certain sequences within the PVY ...
[摘要] [摘要] 马铃薯Y病毒（PVY）是马铃薯Y病毒属（Potyvirus，Potyvirus，Potyvirus科）的模式成员，是危害马铃薯最广泛的病毒之一，被列为最具经济危害性的五大植物病毒之一。最近，低温电子显微镜技术已经确定了PVY病毒离子的结构，这为功能性研究打开了大门，可以探索在病毒周期的不同阶段中所选择的氨基酸的参与。唯一能在植物体内挑战PVY外壳蛋白或其它病毒蛋白中特定氨基酸的作用的方法是使用cDNA克隆。与其他马铃薯Y病毒不同，PVY cDNA克隆的使用和操作一直受到PVY基因组中某些序列对大肠杆菌的毒性的影响。在这里，我们描述了一个已发表的PVY cDNA克隆，它含有克服上述毒性的内含子，以探索不同外壳蛋白修饰对病毒感染的影响。该方案包括在大肠杆菌中操作cDNA克隆，用构建的克隆对植物进行生物接种，观察对植物的生物学效应，通过逆转录定量PCR对cDNA克隆进行定量，并通过透射电镜证实病毒离子的形成。未来的可能性包括使用荧光蛋白报告者标记的PVY cDNA克隆，以进一步深入了解外壳蛋白突变对PVY病毒离子细胞间运动的影响。
[背景] ...
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| Functional ex-vivo Imaging of Arterial Cellular Recruitment and Lipid Extravasation
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Author:
Date:
2017-06-20
[Abstract] The main purpose of this sophisticated and highly versatile method is to visualize and quantify structural vessel wall properties, cellular recruitment, and lipid/dextran extravasation under physiological conditions in living arteries. This will be of interest for a broad range of researchers within the field of inflammation, hypertension, atherosclerosis, and even the pharmaceutical industry. Currently, many researchers are using in vitro techniques to evaluate cellular recruitment, like transwell or flow chamber systems with cultured cells, with unclear physiological comparability. The here introduced method describes in detail the use of a sophisticated and flexible method to study arterial wall properties and leukocyte recruitment in fresh and viable murine carotid arteries ex ...
[摘要] 这种复杂和多功能方法的主要目的是在活体动物的生理条件下可视化和量化结构血管壁性质，细胞募集和脂质/葡聚糖外渗。这对于广泛的炎症，高血压，动脉粥样硬化甚至制药行业的研究人员都是有兴趣的。目前，许多研究人员正在使用体外技术来评估细胞募集，如具有培养细胞的transwell或流动室系统，具有不清楚的生理学可比性。这里介绍的方法详细描述了使用复杂而灵活的方法来研究在动脉血流条件下体外新鲜和活的鼠颈动脉中的动脉壁特性和白细胞募集。该模型模拟体内情况，并允许使用从两个不同供体分离的细胞和动脉（例如，野生型与特异性敲除）组合成一个实验，从而提供关于白细胞和/或内皮细胞特性的信息两个捐助者。因此，该模型可以被认为是复杂和侵入性体内研究的替代方案，例如对比实验。
【背景】该方法的核心是应用双光子激光扫描显微镜（TPLSM）来显示安装在动脉造影腔室中的体外颈动脉，其已显示模拟体内情况下存在的生理条件（Megens et al。，2007）。新鲜的动脉，在我们这种情况下是小鼠颈动脉，但该方法也适用于其他类似大小的血管（包括人类血管）（Bloksgaard等，2015），仔细提取并安装在使用细线的两个玻璃微量移液管的动脉造影室。该腔室应提供足够的空间以用显微镜物镜（优选为具有> ...
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