| RETRACTED: Paper Lateral Flow Biosensor for Nodavirus Reverse Transcribed RNA Detection
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Author:
Date:
2020-08-05
[Abstract] Paper nanobiosensors have been established as an excellent platform for analysis of veterinary and human pathogens causing various diseases. Especially, lateral flow assays or biosensors ideal for sensitive, rapid, robust and accurate analysis in laboratory setups and on-site analysis. Viral RNA detection is of great importance for public health as well as animal health protection. In that aspect, the present protocol focuses on the development of functionalized gold nanoparticle-based lateral flow biosensor for fish nervous necrosis virus (Nodavirus) nucleic acids detection. Total viral RNA, isolated from fish samples was subjected to reverse transcription PCR amplification and the amplification products were mixed with specific oligonucleotide probe. A red test line was formed when ...
[摘要] [摘要] 纸纳米生物传感器已经成为分析导致各种疾病的兽医和人类病原体的一个极好的平台。尤其是侧向流分析或生物传感器是实验室设备和现场分析中灵敏、快速、可靠和准确分析的理想选择。病毒RNA检测对公共卫生和动物健康保护具有重要意义。在这一方面，本协议的重点是开发功能化金纳米粒子侧流生物传感器，用于鱼类神经坏死病毒（Nodavirus）核酸检测。从鱼类标本中分离出的总病毒RNA进行逆转录PCR扩增，扩增产物与特异性寡核苷酸探针混合。当有nodavirus产物存在时，形成红色检测线。这种方法对基础研究有很大的意义，因为它消除了耗时、繁琐的电泳程序的需要，并且可以在养鱼场对养鱼户进行调整。利用这种生物分析平台进行病害监测，无需耗费大量时间和成本，对水产养殖和环境安全有很大影响。
[背景] 关注点和/或现场生物分析一直是关注人类和动物福祉的研究工作的最终目标。基于纸基的传感平台具有功能化简单、重现性好、制造成本低等优点，是一种极具吸引力的分析平台。纸基分析设备已应用于小分子、蛋白质和各种核酸的分析（Parolo和Merkoçi，2013；Bahadir和Sezgintürk，2016；Jiang等人，2019）。侧流生物传感器（LFB）是一种带有干试剂的预制材料条带，通过流体样品激活。它们专为一次性一次性使用而设计，只要有足够的开/关信号（Posthuma ...
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| Purification of Soluble Recombinant Human Tau Protein from Bacteria Using Double-tag Affinity Purification
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Author:
Date:
2018-11-20
[Abstract] Dysfunction of the microtubule-associated protein Tau (encoded by the MAPT gene) has been implicated in more than twenty neurodegenerative diseases, including Alzheimer’s. As such, the physiological and disease-relevant functions of Tau have garnered great interest in the research community. One barrier hampering investigations into the functions of Tau and the generation of pharmacological agents targeting Tau has been the difficulty of obtaining soluble Tau protein in purified form. Here, we describe a protocol that uses dual affinity tag purification to selectively purify soluble recombinant Tau protein from bacteria that is functionally active for downstream applications including immunization, microtubule binding assays, and protein-protein interaction studies.
[摘要] 微管相关蛋白Tau（由 MAPT 基因编码）的功能障碍已经涉及20多种神经退行性疾病，包括阿尔茨海默病。 因此，Tau的生理和疾病相关功能引起了研究界的极大兴趣。 妨碍对Tau功能的研究和产生靶向Tau的药理学试剂的一个障碍是难以获得纯化形式的可溶性Tau蛋白。 在这里，我们描述了一种方案，该方案使用双亲和标签纯化从细菌中选择性纯化可溶性重组Tau蛋白，所述细菌对于下游应用具有功能活性，包括免疫，微管结合测定和蛋白质 - 蛋白质相互作用研究。
【背景】Tau传统上被定义为微管结合蛋白;然而，在人类疾病中，Tau可以与轴突微管分离并错误定位到其他神经元区室，包括体细胞，树突和突触，其中与非微管蛋白和结构的相互作用驱动神经元功能障碍（Iqbal et al。 ，2016; Wang和Mandelkow，2016; Zhou et al。，2017; McInnes et al。，2018）。尽管神经原纤维缠结形式的Tau聚集体通常存在于死后患病的脑组织中，但研究表明，可溶性Tau，而不是聚集的Tau，是神经元功能障碍的主要原因（Crimins et al。，2012 ; Polydoro et al。，2014; Koss et al。，2016）。因此，研究Tau在疾病中的可溶性功能，例如鉴定蛋白质 - ...
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| Artificial Inoculation of Epichloë festucae into Lolium perenne, and Visualisation of Endophytic and Epiphyllous Fungal Growth
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Author:
Date:
2018-09-05
[Abstract] Natural hosts for the fungal endophyte Epichloë festucae include Festuca rubra (fine fescue) and Festuca trachyphylla (hard fescue). Some strains also form stable associations with Lolium perenne (perennial ryegrass). L. perenne is a suitable host to study fungal endophyte–grass interactions, such as endophytic fungal growth within the plant and epiphyllous growth on the plant surface. Here we provide a detailed protocol based on work by, for artificial inoculation of E. festucae into L. perenne, and newly developed staining and visualization techniques for observing endophytic and epiphyllous hyphae and the expressorium, an appressorium-like structure used by the fungus to exit the plant. The staining method uses a combination of ...
[摘要] 真菌内生菌Epichloëfestucae的天然宿主包括 Festuca rubra （细羊茅）和 Festuca trachyphylla （硬羊茅）。一些菌株也与黑麦草（多年生黑麦草）形成稳定的关联。 升。 perenne 是研究真菌内生菌 - 草相互作用的合适宿主，例如植物内生真菌生长和植物表面的叶生生长。在这里，我们提供了一个基于工作的详细协议，用于 E的人工接种。 festucae 进入 L. perenne ，以及新开发的染色和可视化技术，用于观察内生和附生的菌丝和表达菌，这是一种类似真菌的结构，用于离开植物。染色方法使用葡聚糖结合苯胺蓝二铵盐（AB）和几丁质结合小麦胚凝集素缀合的Alexa Fluor ® 488-（WGA-AF488）的组合。该协议将是研究Epichloë -grass相互作用的有用工具，特别是不同Epichloë - 草关联，各种内生菌 - 宿主发育阶段的比较，以及分析突变Epichloë菌株。
【背景】Latch和Christensen（1985）开发了一种用Epichloë内生菌人工感染草的方案。这项工作一直是广泛的 E的基础。 festucae Fl1- L. perenne 共生研究（Scott et al。，2012年综述）。在我们最近的工作中，我们描述了一种新发现的真菌结构，即能够实现 E的表达式。 ...
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