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Author:
Date:
2021-02-20
[Abstract] Transcription errors can substantially affect metabolic processes in organisms by altering the epigenome and causing misincorporations in mRNA, which is translated into aberrant mutant proteins. Moreover, within eukaryotic genomes there are specific Transcription Error-Enriched genomic Loci (TEELs) which are transcribed by RNA polymerases with significantly higher error rates and hypothesized to have implications in cancer, aging, and diseases such as Down syndrome and Alzheimer’s. Therefore, research into transcription errors is of growing importance within the field of genetics. Nevertheless, methodological barriers limit the progress in accurately identifying transcription errors. Pro-Seq and NET-Seq can purify nascent RNA and map RNA polymerases along the genome but cannot be ...
[摘要] [摘要]转录错误可通过改变表观基因组并引起mRNA的错误整合而严重影响生物体内的代谢过程，从而将其翻译为异常的突变蛋白。此外，真核基因组内有特定转录错误富集的基因组基因座（TEELs），它们由RNA聚合酶与显著更高的错误率转录并推测为具有影响在癌症，老化和疾病例如唐氏综合征和阿尔茨海默'秒。因此，在遗传学领域对转录错误的研究越来越重要。尽管如此，方法上的障碍限制了准确识别转录错误的进展。Pro-Seq和NET-Seq可以沿基因组纯化新生RNA并绘制RNA聚合酶，但不能用于鉴定转录突变。在这里，我们本背景误差模型耦合的精密核圆形测序上运行（EMPC -SEQ），一种方法COMBIN荷兰国际集团测定和圆形测序核上运行与背景误差模型精确地检测新生转录错误和有效地辨别TEELs基因组中。
[背景]核糖核苷酸错掺导致的转录错误在所有活生物体中无处不在（Carey，2015）。假设每个信使RNA（mRNA）可以翻译2-4千次（Schwanhausser et al。，2011），并且许多特殊RNA在给定时间每个细胞仅表达一次（Islam et al。，2011; Pelechano et al。，2011）。，2010），即使是关键残基的单个转录错误也会使特定蛋白质的表达产生很大差异。另外，转录错误可加速蛋白质聚集，导致人类中与年龄有关的疾病（van ...
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Date:
2017-06-05
[Abstract] We successfully introduced targeted knock-out of gene of interest in Chlamydomonas reinhardtii by using DNA-free CRISPR. In this protocol, the detailed procedures of an entire workflow cover from the initial target selection of CRISPR to the mutant analysis using next generation sequencing (NGS) technology. Furthermore, we introduce a web-based set of tools, named CRISPR RGEN tools (http://www.rgenome.net/), which provides all required tools from CRISPR target design to NGS data analysis.
[摘要] 我们通过使用无DNA的CRISPR成功地引入了目标克隆在赖氨酸衣藻中的目标基因敲除。在该协议中，整个工作流程的详细过程涵盖从初始目标选择CRISPR到使用下一代测序（NGS）技术的突变体分析。此外，我们介绍一种基于Web的工具集，名为CRISPR RGEN工具（ http：// www.rgenome.net/ ），其中提供了CRISPR目标设计到NGS数据分析的所有必需工具。
背景 我们最近报道（Baek等人，2016），使用预先组装的Cas9蛋白质指导RNA核糖核蛋白，模型绿色微藻（Chlamydomonas ...
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