|
Author:
Date:
2017-06-05
[Abstract] A major barrier for using non-viral vectors for gene therapy is the short duration of transgene expression in postmitotic tissues. Previous studies showed transgene expression from conventional plasmid fell to sub-therapeutic level shortly after delivery even though the vector DNA was retained, suggesting transcription was silenced in vivo (Nicol et al., 2002; Chen et al., 2004). Emerging evidence indicates that plasmid bacterial backbone sequences are responsible for the transcriptional repression and this process is independent of CpG methylation (Chen et al., 2008). Dumbbell-shaped DNA vectors consisting solely of essential elements for transgene expression have been developed to circumvent these drawbacks. This novel non-viral vector has been shown ...
[摘要] 使用非病毒载体进行基因治疗的主要障碍是在postmitotic组织中转基因表达的持续时间短。以前的研究表明，即使载体DNA被保留，传代质粒的转基因表达也在递送后不久就下降到亚治疗水平，提示转录在体内沉默（Nicol等人）。 ，2002; Chen等人，2004）。新出现的证据表明质粒细菌骨架序列负责转录抑制，该过程与CpG甲基化无关（Chen等人，2008）。仅开发了用于转基因表达的必需元件的哑铃型DNA载体已被开发出来，以规避这些缺点。已经显示这种新的非病毒载体在体外和体内改善转基因表达（Schakowski等人，2001和2007）。在这里我们描述一种快速有效地生产最小化的表达小RNA的哑铃载体的新方法。简言之，将PCR扩增的启动子序列连接到化学合成的发夹RNA编码DNA模板以形成共价闭合的哑铃载体。这种新技术可以促进哑铃型载体用于临床前研究和人类基因治疗的应用。
背景 关于递送，小的载体大小有利地改善细胞外转运，包括通过细胞外基质网络的外渗和扩散以及细胞摄取和核扩散。已经开发了各种哑铃载体生产方法，包括产生表达小RNA的哑铃的方法，例如小发夹RNA（shRNA）和微小RNA（miRNA）（Schakowski等人，2001; ...
|