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50% glycerol

Company: EMD Millipore
Catalog#: 1.07051.0521
Bio-protocol()
Company-protocol()
Other protocol()

Fluorescently Labelled Aerolysin (FLAER) Labelling of Candida albicans Cells
Author:
Date:
2017-06-05
[Abstract]  In this protocol we describe a nonradiolabelled labelling of GPI anchor in Candida albicans. The method uses a fluorescent probe to bind specifically to GPI anchors so that the level of GPI-anchored proteins at the cell surface can be measured. The labelling does not need permeabilization of cells and can be carried out in vivo. [摘要]  在本协议中,我们描述了白色念珠菌中GPI锚的非放射性标记标记。该方法使用荧光探针特异性结合GPI锚点,从而可以测量细胞表面的GPI锚定蛋白的水平。标记不需要细胞的透化,并且可以在体内进行进行。

背景 GPI(糖基磷脂酰肌醇)锚是在内质网(ER)中发生的翻译后修饰。预先形成的GPI锚定体连接到携带GPI锚定附着信号序列的特异性蛋白质的C末端的ER的内腔中。这些蛋白质随后通过分泌途径转移(并进一步修饰)到细胞表面,其中蛋白质锚定在质膜的细胞外小叶上或共价连接到具有壁的生物中的细胞壁。各种蛋白质在真核生物中获得GPI锚定蛋白,例如水解酶,细胞表面粘附分子或受体蛋白(Orlean和Menon,2007)。在真菌病原体中,例如白色念珠菌,参与宿主识别和粘附的许多粘附素以及几种发病机理和毒力因子是GPI锚定蛋白;此外,白色念珠菌中的几种GPI锚定蛋白具有蛋白水解活性(Richard和Plaine,2007; Nobile等人,2008)。该途径在白色念珠菌中是必不可少的,并且其下调或靶向它可能是打击念珠菌感染的有用策略。本文详细阐述了用于评估白色念珠菌中GPI锚定水平的方案。
 荧光标记的Aerolysin(FLAER)是荧光素标记的非溶性细胞溶解素的无活性衍生物,革兰氏阴性细菌毒素,其与真核宿主的细胞膜中的GPI锚定的蛋白质结合并形成孔(Howard等, ...

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