| An in vitro DNA Sensor-based Assay to Measure Receptor-specific Adhesion Forces of Eukaryotic Cells and Pathogens
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Author:
Date:
2020-09-05
[Abstract] Motility of eukaryotic cells or pathogens within tissues is mediated by the turnover of specific interactions with other cells or with the extracellular matrix. Biophysical characterization of these ligand-receptor adhesions helps to unravel the molecular mechanisms driving migration. Traction force microscopy or optical tweezers are typically used to measure the cellular forces exerted by cells on a substrate. However, the spatial resolution of traction force microscopy is limited to ~2 µm and performing experiments with optical traps is very time-consuming.
Here we present the production of biomimetic surfaces that enable specific cell adhesion via synthetic ligands and at the same time monitor the transmitted forces by using molecular tension sensors. The ligands were ...
[摘要] [摘要 ] 组织内真核细胞或病原体的运动性是通过与其他细胞或细胞外基质特异性相互作用的转换来介导的。这些配体-受体粘附的生物物理特征有助于揭示驱动迁移的分子机制。牵引力显微镜或光学镊子通常用于测量细胞在基质上施加的细胞力。但是，牵引力显微镜的空间分辨率仅限于〜2 µm，使用光阱进行实验非常耗时。
在这里，我们介绍了仿生表面的生产，该表面能够通过合成配体实现特定的细胞粘附，同时通过使用分子张力传感器监控传递的力。将配体与双链DNA探针偶联，该探针具有确定的DNA解链力阈值。从而将pN范围内的受体介导力半定量转换为荧光信号，可以通过标准荧光显微镜在分辨率极限（〜0.2 µm）上检测到。
该测定的模块化设计允许改变所呈现的配体和DNA探针的机械强度，这为探测不同的真核细胞类型和病原体的粘附提供了多种可能性，此处以骨肉瘤细胞和伯氏疟原虫子孢子体为例。
[背景 ] 运动细胞和病原体以多种不同方式与环境相互作用（Parsons 等，2010； Nan ，2017； Muthinja 等，2018 ）。例如，跨膜受体将单个细胞锚定在其环境中，并使其与其他细胞相互作用（Hynes ，1992）。整联蛋白是将细胞连接到细胞外基质的主要受体，它以双向方式传递力（Schoen et ...
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| Determination of Polyhydroxybutyrate (PHB) Content in Ralstonia eutropha Using Gas Chromatography and Nile Red Staining
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Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract] Ralstonia eutropha H16 produces and mobilizes (re-utilizes) intracellular polyhydroxybutyrate (PHB) granules during growth. This protocol describes the visualization of intracellular Nile red stained PHB granules and the quantification of PHB by gas chromatography. Our first method describes how to analyze PHB granules by fluorescence microscopy qualitatively. Our second approach enables the conversion of PHB to volatile hydroxycarboxylic acid methyl esters by acidic methanolysis and their quantification by gas chromatography. Through this method, it is possible to obtain an absolute quantification of PHB, e.g., per cell dry weight.
[摘要] 在生长过程中，富养罗尔斯通氏菌H16产生和动员（重新利用）细胞内聚羟基丁酸酯（PHB）颗粒。 该协议描述了细胞内尼罗红染色的PHB颗粒的可视化和通过气相色谱定量PHB。 我们的第一种方法描述了如何通过荧光显微镜定性分析PHB颗粒。 我们的第二种方法可以通过酸性甲醇分解和气相色谱定量法将PHB转化为挥发性羟基羧酸甲酯。 通过该方法，可以获得PHB的绝对定量，例如，每细胞干重。
【背景】聚羟基脂肪酸酯（PHA），尤其是聚羟基丁酸酯（PHB），是许多原核生物物种中的能量和碳储存化合物，确保细菌在压力条件下存活（Anderson和Dawes，1990;Pötter和Steinbüchel，2006; Jendrossek和Pfeiffer，2014; Bresan， >等。，2016）。这些生物聚合物的工业应用是生物降解塑料的生产（Chen，2009; Riedel等人，2015）和潜在药物成分的研究（Wu，2009; Zonari等人， ，2015; Pacheco et al。，2015; Giretova ...
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| Phototaxis Assays of Synechocystis sp. PCC 6803 at Macroscopic and Microscopic Scales
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2017-06-05
[Abstract] Phototaxis is a mechanism that allows cyanobacteria to respond to fluctuations in the quality and quantity of illumination by moving either towards or away from a light source. Phototactic movement on low concentration agar or agarose plates can be analyzed at macroscopic and microscopic scales representing group behavior and single cell motility, respectively. Here, we describe a detailed procedure for phototaxis assays on both scales using the unicellular cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803.
[摘要] Phototaxis是允许蓝细菌通过朝向或远离光源移动来响应照明质量和数量的波动的机制。分别在低浓度琼脂或琼脂糖平板上的光镜移动可以分别表示组织行为和单细胞运动性的宏观和微观尺度。在这里，我们描述了使用单细胞蓝细菌集胞藻的两种鳞片上的光趋化测定的详细程序。 PCC 6803。
背景 模型生物 Synechocystis sp。 PCC 6803使用伸缩型IV皮脂（T4P）以潮汐表面移动，称为抽动动力。两个分泌的ATP酶（PilB和PilT）负责扩增和缩回菌毛装置，从而将细胞向前拉。集胞藻 sp。 PCC 6803拥有覆盖整个可见光谱的各种光感受器。光的吸收可以根据波长和强度刺激正或负光趋向性。最近，已经证明，单细胞集胞藻 PCC 6803能够通过将光聚焦在远侧的尖锐焦点上来直接检测单向照明（Schuergers等人，2016）。此外，显示抽动运动的方向与运动ATPase PilB的特定近端定位相关（Schuergers等人，2015）。提出了一种模型，即聚焦导致对运动装置的局部抑制，从而确定单个细胞作为远离焦点的光电响应的移动方向（Schuergers等人，2016） ）。
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