| Histone Deubiquitination Assay in Nicotiana benthamiana
|
|
Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract] Histone modifications are a group of post-translational modifications on histones which can alter chromatin structure and affect gene expression. Histone ubiquitination is a histone modification found in particular on histone H2A and H2B. Histone ubiquitination can be reversed by ubiquitin-specific proteases (UBP). Here, we describe an in vivo assay for histone deubiquitination activity. After infiltrating UBP12 into Nicotiana benthamiana leaves, H2Aub was visualized by immunocytochemistry. Nicotiana benthamiana leaves, which show high agro infiltration efficiency, were used for transient UBP12 expression for a labor- and time-saving protocol. Reduced H2Aub levels indicated histone deubiquitination activity of UBP12. The clear visualization of nuclei of N. ...
[摘要] 组蛋白修饰是一组组蛋白翻译后修饰，可以改变染色质结构并影响基因表达。组蛋白泛素化是组蛋白H2A和H2B特异性发现的组蛋白修饰。泛素特异性蛋白酶（UBP）可以逆转组蛋白泛素化。在这里，我们描述了组蛋白去泛素化活性的体内试验。在将UBP12渗入烟草叶片中后，通过免疫细胞化学观察H2Aub。表现出高的农业渗透效率的本氏烟草叶用于瞬时UBP12表达，用于节省劳力和时间的方案。 H2Aub水平降低表明UBP12的组蛋白去泛素化活性。 N的核的清晰可视化。本生叶使得该方法能够通过使用特异性抗体容易地测量体内组蛋白修饰的水平，从而提供强大的蛋白质功能线索。因此，该协议是组蛋白去泛素化活性的体外试验的有力补充。
【背景】组蛋白修饰在调节染色质结构和基因表达中发挥重要作用。 研究最深入的组蛋白修饰包括甲基化，乙酰化，磷酸化，泛素化和sumoylation。 然而，引入或去除特定组蛋白修饰的酶并不总是已知的。 强大的体外试验可以确定组蛋白修饰酶的催化潜能，但是体内试验方法对于确认体外试验的特异性反映抗体的特异性是必要的。 体内活动。 在这里，我们描述了一个灵活的协议来测试植物组织中组蛋白修饰酶的活性。本塞姆氏。 尽管我们使用该方案来测试遍在蛋白特异性蛋白酶（UBP）对泛素化H2A的活性，但它也可以容易地用于其他特异性抗体可用的组蛋白修饰。
|
|
|
| Whole-seed Immunolabeling of Arabidopsis Mucilage Polysaccharides
|
|
Author:
Date:
2017-06-05
[Abstract] In addition to synthesizing and secreting copious amounts of pectic polymers (Young et al., 2008), Arabidopsis thaliana seed coat epidermal cells produce small amounts of cellulose and hemicelluloses typical of secondary cell walls (Voiniciuc et al., 2015c). These components are intricately linked and are released as a large mucilage capsule upon hydration of mature seeds. Alterations in the structure of minor mucilage components can have dramatic effects on the architecture of this gelatinous cell wall. The immunolabeling protocol described here makes it possible to visualize the distribution of specific polysaccharides in the seed mucilage capsule.
[摘要] 除了合成和分泌大量的果胶聚合物（Young等人，2008）外，拟南芥种皮表皮细胞产生少量的二级纤维素和半纤维素细胞壁（Voiniciuc等，，2015c）。这些组分复杂连接，并在成熟种子水合时作为大胶囊释放。在较小的粘液组分的结构中的改变可以对该凝胶状细胞壁的结构产生显着的影响。这里描述的免疫标记方案使得可以可视化种子胶囊中特定多糖的分布。
背景 自从拟南芥种皮表皮细胞（Young等人，2008）第一次富含果胶的胶质综合免疫荧光分析以来，在这种特殊的细胞壁中已经检测到另外类型的多糖（Voinicucucum，等等。，2015a; 2015b和2015c）。为了平行处理更多的样本，我修改了原始方案（在1.5 ml微量离心管中执行; Young等人，2008; Harpaz-Saad等人，2011年）到24孔板格式。我建议用Pontamine S4B（一种比以前的污渍更具体的纤维素荧光染料）来重新研磨种子（Anderson等人，2010）。通过测试多个荧光团之间的串扰，并为图像采集和处理设定明确的指导，该方案产生可重复的粘液表型，可以可靠地解释。
|
|
|