| Measuring Secretion of Capsidiol in Leaf Tissues of Nicotiana benthamiana
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Author:
Date:
2018-08-05
[Abstract] Plant species produce a wide variety of antimicrobial metabolites to protect themselves against potential pathogens in natural environments. Phytoalexins are low molecular weight compounds produced by plants in response to attempted attacks of pathogens. Accumulation of phytoalexins in attacked plant tissues can inhibit the growth of penetrating pathogens. Thus phytoalexins play a major role in post-invasion defense against pathogens. Major phytoalexins produced by Solanaceous plants are sesquiterpenoids such as capsidiol produced by Nicotiana and Capsicum species, and rishitin produced by Solanum species, which are synthesized in the cytosol and secreted into the intercellular space of plant tissues. We previously reported that deficiency in capsidiol secretion ...
[摘要] 植物物种产生多种抗微生物代谢物，以保护自身免受自然环境中潜在的病原体的侵害。植物毒素是由植物响应于病原体的企图攻击而产生的低分子量化合物。植物抗毒素在受攻击的植物组织中的积累可以抑制穿透性病原体的生长。因此，植物抗毒素在入侵后对抗病原体的防御中起主要作用。茄科植物产生的主要植物抗毒素是倍半萜类化合物，如由 Nicotiana 和 Capsicum 物种产生的衣壳菌素，以及由 Solanum 物种产生的rishitin，其在胞质溶胶分泌到植物组织的细胞间隙中。我们以前曾报道，衣壳菌素分泌不足会导致本塞姆氏烟草对马铃薯晚疫病菌致病疫霉的敏感性增加。在这里，我们描述了一种测量 N中分泌的衣壳二醇的实用方案。本塞姆氏
【背景】该方案提供了一种快速简便的方法来量化衣壳菌醇的分泌，如Shibata 等（2016）所述。 因为环己烷通常用作洗去花粉层的溶剂，但能保持花粉活力（Doughty et al。，1993），我们开发了这种方法从叶子表面洗去分泌的代谢物来量化细胞外capsidiol。 可以使用该方法分析质膜局部转运蛋白的功能，同时还允许其与其他方法结合使用，例如使用质膜囊泡的生化转运分析（例如，Sugiyama 等人，，2007），以确定所检查的转运蛋白的底物。
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| A Procedure for Precise Determination of Glutathione Produced by Saccharomyces cerevisiae
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Author:
Date:
2018-06-20
[Abstract] In bioproduction, yields of products must be calculated precisely for accurate evaluation of various fermentation conditions. To evaluate productivity of microorganisms, product amounts per unit of medium volume (e.g., mg-product/L-broth), and/or product amounts per unit of a microorganism amount (e.g., mg-product/mg-dry cell weight) are often used. Nonetheless, detailed procedures for calculation of these production yields are often omitted in research articles, whereas methods for product quantification are described well. Here, we describe a detailed calculation procedure from our previous studies on glutathione production by Saccharomyces cerevisiae. This procedure can be applied to various other products and microorganisms, and therefore, may prove to be ...
[摘要] 在生物生产中，必须精确计算产品的产量，以准确评估各种发酵条件。 为了评估微生物的生产力，每单位培养基体积的产物量（例如，mg-产物/ L-肉汤）和/或每单位微生物量的产物量（例如， ，毫克产品/毫克干细胞重量）经常使用。 尽管如此，在研究文章中常常忽略用于计算这些产量的详细程序，而产品量化的方法则被很好地描述。 在这里，我们描述了我们以前关于酿酒酵母产生谷胱甘肽的研究的详细计算过程。 该程序可以应用于各种其他产品和微生物，因此可能证明可用于各种其他生物生产研究。
【背景】谷胱甘肽是所有生物体中含量最高的含巯基三肽，并且作为在细胞中具有不同作用的生物活性物质起作用，例如作为氧化还原和解毒剂。因此，谷胱甘肽如今被广泛用于医疗，食品和化妆品行业，并且近年来需求增加。谷胱甘肽在工业上主要通过使用原始含有高浓度谷胱甘肽的酿酒酵母进行发酵生产，并且已经作为安全的食品生产微生物。对各种微生物中的微生物谷胱甘肽产生的研究在未来将变得更加重要。为了评估各种微生物发酵产生谷胱甘肽的效率，我们在这里描述了我们详细的样品制备程序，高效色谱（HPLC）定量还原和氧化谷胱甘肽的方法，以及两种产量的计算方法（Hara ） 2012; Hara等人，2015; Kiriyama等人，2013; Kobayashi等人 2017年）。
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| Generation of Mutant Pigs by Direct Pronuclear Microinjection of CRISPR/Cas9 Plasmid Vectors
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Author:
Date:
2017-06-05
[Abstract] A set of Cas9 and single guide CRISPR RNA expression vectors was constructed. Only a very simple procedure was needed to prepare specific single-guide RNA expression vectors with high target accuracy. Since the de novo zygotic transcription had been detected in mouse embryo at the 1-cell stage, the plasmid DNA vectors encoding Cas9 and GGTA1 gene specific single-guide RNAs were micro-injected into zygotic pronuclei to confirm such phenomenon in 1-cell pig embryo. Our results demonstrated that mutations caused by these CRISPR/Cas9 plasmids occurred before and at the 2-cell stage of pig embryos, indicating that besides the cytoplasmic microinjection of in vitro transcribed RNA, the pronuclear microinjection of CRISPR/Cas9 DNA vectors provided an efficient solution to ...
[摘要] 构建了一套Cas9和单引导CRISPR RNA表达载体。 需要一个非常简单的程序来制备具有高目标精度的特异性单向RNA表达载体。 由于在1细胞期的小鼠胚胎中已经检测到了合并的合子转录，所以将编码Cas9和GGTA1基因特异性单向RNA的质粒DNA载体微注射到合子原核中以确认 1细胞猪胚胎现象。 我们的研究结果表明，这些CRISPR / Cas9质粒引起的突变发生在猪胚胎的2细胞阶段之前和之后，表明除了体外转录的RNA的细胞质显微注射外，CRISPR / Cas9 DNA载体为产生基因敲除猪提供了有效的解决方案。
背景 由于最初发现了大肠杆菌基因组（Ishino）中的大肠杆菌基因组下游的32bp间隔的串联重复的高度保守的29个碱基对（bp）序列，等等，1987; Nakata等人，1989），在约50％至50bp的大小变化的短定期间隔重复序列的家族中发现约50％细菌和90％的古细菌（Makarova等人，2015）。根据它们的特征结构，Mojica（Mojica等人，2009）和Jansen（Jansen等人）引入了定期交织的短回文重复序列（CRISPR）的名称， ，2002），目前普遍使用。首先通过核苷酸序列比对（Jansen等人，2002）在CRISPR基因座的侧翼首先鉴定了一组CRISPR相关基因 cas1 ...
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