| Qualitative in vivo Bioluminescence Imaging
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Author:
Date:
2018-09-20
[Abstract] Bioluminescence imaging (BLI) technology is an advanced method of carrying out molecular imaging on live laboratory animals in vivo. This powerful technique is widely-used in studying a variety of biological processes, and it has been an ideal tool in exploring tumor growth and metastatic spread in real-time. This technique ensures the optimal use of laboratory animal resources, particularly the ethical principle of reduction in animal use, given its non-invasive nature, ensuring that ongoing biological processes can be studied over time in the same animal, without the need to euthanize groups of mice at specific time points. In this protocol, the luciferase imaging technique was developed to study the effect of co-inoculating pericytes (contractile, αSMA+ mesenchymal ...
[摘要] 生物发光成像（BLI）技术是一种在体内实验室动物上进行分子成像的先进方法。 这种强大的技术广泛应用于研究各种生物过程，是实时探索肿瘤生长和转移扩散的理想工具。 该技术确保实验室动物资源的最佳利用，特别是减少动物使用的伦理原则，考虑到其非侵入性，确保可以在同一动物中随时间研究正在进行的生物过程，而无需安乐死 小鼠在特定的时间点。 在该方案中，开发了荧光素酶成像技术以研究共同接种周细胞（收缩性，αSMA + 间充质干细胞样细胞，位于微血管内的细胞）对生长和转移性扩散的影响。 卵巢癌使用侵袭性卵巢癌细胞系-OVCAR-5-作为例子。
【背景】生物发光成像（BLI）的原理是基于相对简单的生化过程的发光特性，即，荧光素酶介导的分子底物荧光素氧化产生光。在癌症研究中，BLI是一种流行的工具（Contag et ...
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| In vivo Priming of T Cells with in vitro Pulsed Dendritic Cells: Popliteal Lymph Node Assay
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Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] One-way mixed lymphocyte reaction (MLR) is a classic tool to measure how T cells react to external stimuli. However, MLR is an in vitro reaction system, which shows different response intensity compared with in vivo trails sometimes due to the lack of cytokines, tissue matrix and other immune response associated factors. The following popliteal lymph node assay (PLNA) protocol is designed to test the T cells antigen-specific reaction in vivo by using ovalbumin (OVA) specific reacted transgenic mouse OT-1 and OT-2.
[摘要] 单向混合淋巴细胞反应（MLR）是测量T细胞如何与外部刺激反应的经典工具。 然而，MLR是体外反应系统，其与体内踪迹相比显示出不同的反应强度，有时由于缺乏细胞因子，组织基质和其他免疫应答相关因素。 设计了以下po淋巴结测定（PLNA）方案，通过使用卵白蛋白（OVA）特异性反应的转基因小鼠OT-1和OT-2，体内测试T细胞抗原特异性反应。
【背景】在移植中，自身免疫和感染研究中，单向混合淋巴细胞反应（MLR）是评估T细胞增殖在抗原存在细胞（APC）或其他外部刺激反应中是否增加或抑制的有用参数。 这是一个典型的功能测试，它展示了T细胞如何受到免疫抑制药物（Hou et al。，2015; Zhang et al。，2015），阴性细胞或外来体疫苗（Ma）的测试试剂的影响 et al。，2016; Cai et al。，2017）。
然而，由于体外免疫反应系统，该系统具有一定的限制。 体内免疫反应受生物微环境的影响，如细胞因子，趋化因子，激素分泌，组织基质等未知生物因子。
在这里，po淋巴结测定（PLNA）被设计为体内工具，通过使用卵白蛋白（OVA）抗原特异性反应系统来测试增加或减少的免疫应答（Bhatt等，2014; Cai et al。，2017）。
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| ELISPOT Assay to Measure Peptide-specific IFN-γ Production
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Author:
Date:
2017-06-05
[Abstract] Interferon-gamma (IFN-γ) is crucial for immunity against intracellular pathogens and for tumor control. It is produced predominantly by natural killer (NK) and natural killer T cells (NKT) as well as by antigen-specific Th1 CD4+ and CD8+ effector T cells. When investigating immune responses against pathogens and cancer cells, measuring antigen-specific cytokine-responses by cells of adaptive immunity offers an advantage over total non-specific cytokine responses. Significantly, the measurement of antigen-specific IFN-γ responses against pathogens or cancer cells, when compared to a treatment group, provides a quantitative measure of how well the treatment works. Measuring antigen-specific IFN-γ responses involves culture of the cells being considered (CD4+ ...
[摘要] 干扰素-γ（IFN-γ）对细胞内病原体免疫和肿瘤控制至关重要。它主要由天然杀伤剂（NK）和天然杀伤T细胞（NKT）以及抗原特异性Th1 CD4 + / sup和CD8 + /效应T细胞产生。当研究针对病原体和癌细胞的免疫应答时，通过适应性免疫测量细胞的抗原特异性细胞因子反应提供了优于总非特异性细胞因子反应的优点。值得注意的是，与治疗组相比，抗病原体或癌细胞的抗原特异性IFN-γ反应的测量提供了治疗效果的定量测量。测量抗原特异性IFN-γ应答涉及用抗原呈递细胞（APC）和特异性肽从正在考虑的细胞（CD4 + sup +或CD8 + sup + T细胞）与没有肽的对照培养物相比，靶病原体或癌细胞。在合适的时间范围之后，通过ELISPOT测定来测量释放的细胞因子。有或无肽分泌IFN-γ的细胞数量的差异是抗原特异性IFN-γ应答的量度。该测定可以应用于其它细胞因子如IL-10。
背景 干扰素γ（IFN-γ）是二型可溶性细胞因子，其是II类干扰素的唯一成员（Gray和Goeddel，1982）。 IFN-γ具有抗病原体，免疫调节和抗肿瘤特性（Schroder等人，2004），其促进NK细胞活性，增加抗原呈递，激活诱导型一氧化氮合酶，诱导从激活的浆细胞产生IgG2a，并通过上调转录因子T-bet来促进T 1分化。
＆NBSP;鉴于这种细胞因子在免疫应答中的重要作用，有几个方法来量化IFN-γ。也许最简单的措施是ELISA测定法，用于通过用抗体捕获细胞因子来测量血清样品和组织培养上清液中细胞因子的水平（Schreiber，2001）。还有一种基于流式细胞术的测定法，其中细胞内IFN-γ在细胞透化后通过流式细胞术检测（Andersson等人，1988）。含有细胞因子的细胞的百分比通常较低，并且不表示蛋白质是否是功能性的，如果其被分泌并且不测量其是否响应于特异性靶抗原或多种抗原。 ...
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