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Company: Thermo Fisher Scientific

Catalog#: 12563011

From 3D to 2D: Harmonization of Protocols for Two-dimensional Cultures on Cell Culture Inserts of Intestinal Organoids from Various Species

David Warschkau, Estefanía Delgado-Betancourt, David Holthaus, Antonia Müller, Gudrun Kliem, Susanne M. Krug, Joerg-Dieter Schulzke, Toni Aebischer, Christian Klotz and Frank Seeber

Published online: 2022-01-20

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Other protocol()

Fluidigm Based Single-cell Gene Expression Library Preparation from Patient-derived Small Intestinal Organoids

Author:

Kohei Suzuki and Ryuichi Okamoto,

Date:

2020-10-05

[Abstract] In this protocol, we describe our methods to isolate crypts from patients' biopsy samples and to culture human intestinal stem cells as it’s called “organoid.” Beyond that, we describe how to dissociate organoids cells into single cells for single-cell analysis as a further application. This protocol should provide investigators sufficient tools to generate human organoids from biopsy samples and to accomplish a stable in-vitro assay system. [摘要] [摘要]在此协议中，我们描述了从患者的活检样本中分离隐窝并培养人类肠干细胞（称为“类器官”）的方法。除此之外，我们还介绍了如何将类器官细胞分解为单细胞以进行单细胞分析，作为进一步的应用。该方案应为研究人员提供足够的工具，以从活检样品中产生人类器官并完成稳定的体外测定系统。

[背景]肠上皮是一个多功能组织即编排动态平衡并形成物理屏障。由肠干细胞（ISC）产生的每个肠上皮细胞（IEC）每4-5天更新一次该上皮（Crosnier等，2006 ）。ISC位于隐窝的底部，并表达各种文献先前报道的特定标记（Muñoz等，2012 ；Clevers ，2013 ）。研究表明，干细胞正确更新的功能障碍与肠道疾病有关，对ISCs动态的了解可能阐明了包括炎症性肠病（IBD）在内的各种疾病的发病机制（Okamoto et al。，2016 ）。

然而，由于缺乏能概括生理性肠上皮层的有效模型，因此对肠干细胞特性的研究具有挑战性。史诗般的“类器官”的引入克服了种种障碍（Sato等人，2009和2011 ），可以从单个ISC体外建立类器官，并忠实地保留其起源组织的生理和病理特征（Middendorp等人）。。，2014 ）。类器官已被用于各种胃肠道疾病解剖基础病理变化（Fatehullah 。等人，2016; Noben等人，2017 ...

Efficient Production of Functional Human NKT Cells from Induced Pluripotent Stem Cells − Reprogramming of Human Vα24⁺iNKT Cells

Author:

Daisuke Yamada, Tomonori Iyoda, Kanako Shimizu, Yusuke Sato, Haruhiko Koseki and Shin-ichiro Fujii,

Date:

2017-05-20

[Abstract] Antigen-specific T cell-derived induced pluripotent stem cells (iPSCs) have been shown to re-differentiate into functional T cells and thus provide a potential source of T cells that could be useful for cancer immunotherapy. Human Vα24⁺ invariant natural killer T (Vα24⁺iNKT) cells are subset of T cells that are characterized by the expression of an invariant Vα24-Jα18 paired with Vβ11, that recognize glycolipids, such as α-galactosylceramide (α-GalCer), presented by the MHC class I-like molecule CD1d. Vα24⁺iNKT cells capable of producing IFN-γ are reported to augment anti-tumor responses, which affects both NK cells and CD8⁺ cytotoxic T lymphocytes to eliminate MHC^- and MHC⁺ tumor cells, respectively. Here we describe a ... [摘要] 抗原特异性T细胞来源的诱导多能干细胞（iPSCs）已显示重新分化为功能性T细胞，从而提供可用于癌症免疫治疗的T细胞的潜在来源。不变性自然杀伤T（Vα24^{+ iNKT）细胞的人Vα24 + 细胞是T细胞的子集，其特征在于与Vβ11配对的不变Vα24-Jα18的表达，其识别糖脂，如α-半乳糖神经酰胺（α-GalCer），由MHC I类分子CD1d呈递。据报道能够产生IFN-γ的Vα24 + i / KT细胞增加抗肿瘤反应，其影响NK细胞和CD8 +细胞毒性T淋巴细胞以消除MHC - 和MHC + 肿瘤细胞。在这里，我们描述了将人Vα24 + iNKT细胞重编程到iPSC中的鲁棒方案，然后将其重新分化为Vα24 + iNKT细胞（iPS-Vα24功能的iNKT）。我们进一步提供了测定iPS-Vα24 + iNKT细胞活性的方案。背景以前有报道说，针对晚期非小细胞肺癌（NSCLC）和头颈部癌症的Vα24 + iNKT细胞癌免疫治疗的临床试验显示疗效，耐受性良好（Motohashi et al。等人，2009; Yamasaki等人，2011）。然而，已知来自外周血单核细胞（PBMC）的Vα24} ...

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