| An Image-based Dynamic High-throughput Analysis of Adherent Cell Migration
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Author:
Date:
2021-03-20
[Abstract] In this protocol, we describe a method to monitor cell migration by live-cell imaging of adherent cells. Scratching assay is a common method to investigate cell migration or wound healing capacity. However, achieving homogenous scratching, finding the optimal time window for end-point analysis and performing an objective image analysis imply, even for practiced and adept experimenters, a high chance for variability and limited reproducibility. Therefore, our protocol implemented the assessment for cell mobility by using homogenous wound making, sequential imaging and automated image analysis. Cells were cultured in 96-well plates, and after attachment, homogeneous linear scratches were made using the IncuCyte® WoundMaker. The treatments were added directly to wells and images were ...
[摘要] [摘要]在此协议中，我们描述了一种通过贴壁细胞的活细胞成像监测细胞迁移的方法。刮擦测定法是研究细胞迁移或伤口愈合能力的常用方法。然而，实现均匀的scratc兴，发现为终点analys的最佳时间窗口我S和执行目标图像分析暗示，即使对于实施，并且熟练的实验者，对变异性和有限的再现性的高机会。因此，我们的协议通过使用均质伤口制作，顺序成像和自动图像分析来实现对细胞移动性的评估。细胞在96孔板中培养，和附着后，使用进行了由均质线状痕INCUCYTE ® W¯¯ oundMaker 。将处理直接添加到孔中，每2小时自动捕获一次图像。Ť此后，对图像进行的ProCE ssed通过定义刮擦掩模，并使用细胞汇合掩模软件算法。数据分析是进行使用的INCUCYTE ®细胞迁移分析软件。因此，我们的协议允许以高度可靠，可再现和可重新分析的方式对细胞迁移的治疗效果进行时滞分析。
[背景]划痕测定小号是用于研究细胞迁移一种广泛使用的方法或伤口愈合的能力。然而，常规方法（手动刮擦）需要技能来执行线性刮擦并且是终点测定（Liang等人，2007 ；Krishnamurthy等人，2016）。通常使用Ima geJ或其他软件手动分析数据。最近，我们在细胞迁移测定中采用了Essen Bioscience的高通量自动成像系统IncuCyte ZOOM ...
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| Measurement of Mesenchymal Stem Cells Attachment to Endothelial Cells
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Author:
Date:
2018-03-20
[Abstract] Mesenchymal stem cells (MSCs) have shown profound therapeutic potential in tissue repair and regeneration. However, recent studies indicate that MSCs are largely entrapped in lungs after intravenous delivery and die shortly. The underlying mechanisms have been poorly understood. We have provided evidence to show that excess expression and activation of integrins in culture-expanded MSCs is a critical cause of MSCs adhesion to endothelial cells of the lung microarteries resulting in the entrapment of the cells (Wang et al., 2015). Therefore, it may be meaningful to test the adhesive ability of MSCs to endothelial cells in vitro before intravenous administration to avoid their lung vascular obstructions. Here we report a simple method to measure MSCs attachment to ...
[摘要] 间充质干细胞（MSCs）在组织修复和再生中显示出深远的治疗潜力。 然而，最近的研究表明，MSCs在静脉内递送后很大程度上被截留在肺中并且很快死亡。 基本的机制一直不甚了解。 我们提供的证据表明培养扩增的MSCs中整联蛋白的过量表达和活化是MSCs与肺微动脉的内皮细胞粘附的关键原因，导致细胞的包埋（Wang等人 >，2015）。 因此，在静脉给药之前测试MSC对体外内皮细胞的粘附能力以避免它们的肺血管阻塞可能是有意义的。 在这里，我们报告了一种简单的方法来衡量MSC与内皮细胞的附着。
【背景】间充质干细胞（MSCs）正在成为一种极具潜力的治疗药物，许多临床试验正在进行中（Salem和Thiemermann，2010）。由于MSC的方便性和安全性，静脉输注MSCs已成为近期临床试验中MSCs治疗的流行途径（Wu and Zhao，2012）。然而，越来越多的证据表明，MSCs在血管内注射后引起相当大的血管阻塞。在静脉内输注时，超过80％的MSC被包埋在肺中，并且在急性缺血性心脏或脑中仅检测到少于1％的MSC（Lee等人，2009; Toma等人，等人，2009年）。
最近的研究表明，MSCs在静脉内给药后大部分停留在前毛细血管微血管中，并且其中大部分在短期内局部缺血死亡（Toma等人，2009）。因此，血管内给药的MSC的安全性和有效性已成为人们日益关注的问题。尚未完全了解MSCs血管阻塞的机制。 ...
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| Phagocytosis Assay of Necroptotic Cells by Cardiac Myofibroblasts
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Author:
Date:
2017-09-20
[Abstract] In myocardial infarction (MI), a plenty of cardiomyocytes undergo necrosis and necroptosis due to the lack of oxygen and nutrients. The dead cardiomyocytes are promptly engulfed by phagocytes. When the dead cells are not engulfed, the noxious contents of the cells are released outside, and thus, induce inflammation, and obstruct the function of organs. Therefore, phagocytosis is crucial for maintaining homeostasis of organs. Herein, we describe a protocol of an in vitro phagocytosis assay of necroptotic cells.
[摘要] 在心肌梗死（MI）中，由于缺氧和营养，大量心肌细胞发生坏死和坏死。 死亡心肌细胞迅速吞噬吞噬细胞。 当死细胞不被吞没时，细胞的有害物质被释放到外部，从而引起炎症，并阻碍器官的功能。 因此，吞噬对维持器官的体内平衡至关重要。 在这里，我们描述了一种神经细胞的体外吞噬作用测定方案。
【背景】以前，认为坏死性坏死细胞和坏死核细胞只能通过心脏巨噬细胞在失败的心脏中消除。 然而，我们发现负责组织纤维化的心脏肌成纤维细胞在MI后吞噬死细胞（Nakaya等，2017）。 本文中，我们提供了一种细胞凋亡细胞的体外吞噬作用的详细方案，采用在caspase-3抑制剂Z-VAD-FMK中通过TNF-α刺激进行人脑坏死的L929细胞。
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