| Isolation, Culture, and Differentiation of Primary Myoblasts Derived from Muscle Satellite Cells
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Author:
Date:
2020-07-20
[Abstract] The skeletal muscle is key for body mobility and motor performance, but aging and diseases often lead to progressive loss of muscle mass due to wasting or degeneration of muscle cells. Muscle satellite cells (MuSCs) represent a population of tissue stem cells residing in the skeletal muscles and are responsible for homeostatic maintenance and regeneration of skeletal muscles. Growth, injury, and degenerative signals activate MuSCs, which then proliferate (proliferating MuSCs are called myoblasts), differentiate and fuse with existing multinuclear muscle cells (myofibers) to mediate muscle growth and repair. Here, we describe a protocol for isolating MuSCs from skeletal muscles of mice for in vitro analysis. In addition, we provide a detailed protocol on how to culture and ...
[摘要] [摘要] 骨骼肌是身体活动和运动表现的关键，但是衰老和疾病通常会由于肌肉细胞的浪费或变性而导致肌肉质量的逐步丧失。肌卫星细胞（MuSCs）代表的组织STE群体米细胞小号居住在骨骼肌和负责骨骼肌的体内平衡维持和再生。生长，损伤和变性信号激活MuSC，然后增殖（增殖的MuSC被称为成肌细胞），分化并与现有的多核肌肉细胞（肌纤维）融合，以介导肌肉的生长和修复。在这里，我们描述了从小鼠骨骼肌中分离MuSC的体外实验方案分析。此外，我们提供了有关如何将原代成肌细胞培养和分化成肌管的详细协议，以及用于表征细胞的免疫荧光染色程序。这些方法对于在体外模拟再生肌生成以了解MuSC 的动力学，功能和分子调控至关重要。
[背景] 通过多种细胞功能维持肌肉的动态平衡，对于保持肌肉的完整性至关重要。组织特异性成体干细胞能够在整个生命中连续不断地再生局部组织。在成年骨骼肌中，称为肌肉卫星细胞（MuSC）的干细胞群具有强大的再生能力，这是肌肉动态平衡的关键（Yin 等人，2013； Dumont 等人，2016）。静态MuSC位于与肌肉纤维并列的基底层下方的壁iche中，负责肌肉的生长和再生（Yin 等人，2013； Dumont 等人，2016）。
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| Preparation of Precisely Oriented Cryosections of Undistorted Drosophila Wing Imaginal Discs for High Resolution Confocal Imaging
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Author:
Date:
2018-02-05
[Abstract] The combination of immunofluorescence and laser scanning confocal microscopy (LSM) is essential to high-resolution detection of molecular distribution in biological specimens. A frequent limitation is the need to image deep inside a tissue or in a specific plane, which may be inaccessible due to tissue size or shape. Recreating high-resolution 3D images is not possible because the point-spread function of light reduces the resolution in the Z-axis about 3-fold, compared to XY, and light scattering obscures signal deep in the tissue. However, the XY plane of interest can be chosen if embedded samples are precisely oriented and sectioned prior to imaging (Figure 1). Here we describe the preparation of frozen tissue sections of the Drosophila wing imaginal disc, which allows us to ...
[摘要] 免疫荧光和激光扫描共聚焦显微镜（LSM）的组合是高分辨率检测生物样品中分子分布的关键。频繁的限制是需要在组织内或在特定的平面深处进行成像，这可能由于组织大小或形状而不可接近。因为与XY相比，光的点扩散函数将Z轴的分辨率降低了约3倍，并且光散射使组织中的深层信号模糊，所以不可能重新创建高分辨率3D图像。然而，如果嵌入的样品在成像之前被精确地定向和切片，则可以选择感兴趣的XY平面（图1）。在这里，我们描述的果蝇翅成像光盘的冰冻组织切片的准备，这使得我们能够获得高分辨率的图像，在整个这个折叠上皮的深度。
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图1.上皮结构和未畸变的折叠模式在发育果蝇翅膀的这个冰冻部分的整个深度中都被揭示出来。通过机翼囊横向背腹节。 A.冷冻切片显示贯穿上皮深度的信号的α-连环蛋白（A'，A“，洋红色）的细胞核（A，绿色）和亚细胞分布。基底表面清晰可辨（箭头）。 A是“A的数字增强图像”。 B.在显示为XZ正交视图的自顶向下视图中收集的图像的Z-堆叠揭示了α-连环蛋白（B'，B“）甚至数字增强图像（B”）的细胞核（B）但很少可辨别的细节。未能揭示基底上皮表面（箭头）。 ...
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| Muscle Histology Characterization Using H&E Staining and Muscle Fiber Type Classification Using Immunofluorescence Staining
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Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] Muscle function is determined by its structure and fiber type composition. Here we describe a protocol to examine muscle histology and myofiber types using hematoxylin and eosin (H&E) and immunofluorescence staining, respectively. H&E stain nucleus in blue and cytoplasm in red, therefore allowing for morphological analyses, such as myofiber diameter, the presence of degenerated and regenerated myofibers, and adipocytes and fibrotic cells. Muscle fibers in adult skeletal muscles of rodents are classified into 4 subtypes based on the expression of myosin heavy chain proteins: Myh7 (type I fiber), Myh2 (type IIA fiber), Myh1 (type IIX fiber), Myh4 (type IIB fiber). A panel of monoclonal antibodies can be used to specifically label these muscle fiber subtypes. These protocols are commonly ...
[摘要] 肌肉功能由其结构和纤维类型组成决定。 这里我们描述一个协议，分别检查使用苏木精和伊红（H＆E）和免疫荧光染色的肌肉组织学和肌纤维类型。 H＆E在蓝色和细胞质红色染色核，因此允许形态学分析，如肌纤维直径，退化和再生肌纤维的存在，以及脂肪细胞和纤维化细胞。 基于肌球蛋白重链蛋白Myh7（I型纤维），Myh2（IIA型纤维），Myh1（IIX型纤维），Myh4（IIB型纤维）的表达，将啮齿动物成年骨骼肌肌肉纤维分为4种亚型：。 一组单克隆抗体可用于特异性标记这些肌纤维亚型。 这些方案通常用于肌肉发育，生长和再生的研究（例如：Wang等，2015; Nie等，2016; Yue et al。，2016; Wang et al。，2017）。
【背景】骨骼肌由肌细胞，脂肪细胞，成纤维细胞和其他细胞类型组成。 多核心肌细胞，骨骼肌的主要组成，也称为肌纤维（肌纤维）。 肌肉组织学研究是肌肉功能研究的常规方法。 一般来说，肌纤维的直径和脂肪细胞的程度和纤维化面积与肌肉力量有关（Yue et al。，2016）。 此外，中心有核肌纤维的存在作为肌肉再生期间新再生肌纤维的替代指标（Wang等，2017）。 基于差异代谢性状和肌球蛋白重链（MyHC）亚型的表达，肌纤维分为四种类型（I，IIa，IIx和IIb）。 ...
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