| Analyzing the Properties of Murine Intestinal Mucins by Electrophoresis and Histology
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Author:
Date:
2017-07-20
[Abstract] Specialized secretory cells known as goblet cells in the intestine and respiratory epithelium are responsible for the secretion of mucins. Mucins are large heavily glycosylated proteins and typically have a molecular mass higher than 106 Da. These large proteins are densely substituted with short glycan chains, which have many important functional roles including determining the hydration and viscoelastic properties of the mucus gel that lines and protects the intestinal epithelium. In this protocol, we comprehensively describe the method for extraction of murine mucus and its analysis by agarose gel electrophoresis. Additionally we describe the use of High Iron Diamine-Alcian Blue, Periodic Acid Schiff’s-Alcian Blue and immune–staining methods to identify and differentiate ...
[摘要] 在肠和呼吸上皮中称为杯状细胞的专门分泌细胞负责粘蛋白的分泌。 粘蛋白是大的重糖基化蛋白质，通常具有高于10μM的分子量。 这些大蛋白质被短聚糖链密集取代，其具有许多重要的功能作用，包括测定粘液凝胶的水合和粘弹性质，其保护肠上皮。 在该方案中，我们全面地描述了通过琼脂糖凝胶电泳提取小鼠粘液的方法及其分析。 此外，我们描述了使用高铁二胺 - 阿尔星蓝，周期酸席夫氏 - 阿尔辛蓝和免疫染色方法来鉴别和区分这些粘蛋白糖蛋白上糖基化的不同状态，特别是侧重于硫酸化和唾液酸化。
【背景】一层粘液保护肠上皮，主要由粘蛋白，水，蛋白质和无机盐组成。粘液屏障的粘性和凝胶状特性使其能够物理保护和润滑粘膜，主要由粘蛋白赋予。粘蛋白是大的重糖基化蛋白质，通常具有高于10μM的分子量。然而，粘蛋白主要用O-聚糖糖装饰，其占分子量的80％。不同的位点特异性和粘蛋白特异性糖基化模式影响粘蛋白和粘液凝胶的性质。众所周知，粘蛋白糖基化在感染和疾病中发生改变（Arike等人，2017; ...
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| Lung Section Staining and Microscopy
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Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] Our protocol describes immunofluorescent staining, hematoxylin and eosin staining and Masson’s trichrome staining on lung sections.
[摘要] 我们的方案描述了免疫荧光染色，苏木精和伊红染色以及Masson在肺切片上的三色染色。
背景 肺的主要功能是气体交换。肺由各种专门的细胞和组织组成，包括支气管，细支气管和肺泡，以促进气体交换。为了研究小鼠模型中的肺发育或肺部疾病，可以从小鼠中去除肺，并将其冷冻并嵌入最佳切割温度（OCT）化合物或化学保藏并包埋在石蜡中。为了保持肺组织结构，我们用1ml OCT化合物填充肺，用于制备冷冻切片，或用于石蜡切片的10％缓冲福尔马林（Zhou等人，2016）。然后将肺切片从冷冻或石蜡包埋的肺切片并安装到载玻片上用于制备染色。我们使用冷冻组织切片进行基于抗体的免疫荧光染色，并使用石蜡包埋切片进行苏木精和伊红（H＆E）染色或Masson三色染色。冷冻切片更快地准备免疫荧光染色，大多数抗体在冷冻切片上工作良好。石蜡切片也可用于免疫荧光染色，但需要脱蜡，补液和抗原检索。即使在抗原检索后，一些抗体在石蜡切片上也不能很好地工作。然而，石蜡样品可以在室温下储存很长时间，并且可以容易地切成非常薄的部分。石蜡切片保留比冷冻切片更好的组织形态，因此它们对于H＆E或三色染色更好。
＆NBSP;免疫荧光染色是一种使用荧光团观察特异性结合其靶蛋白的抗体位置的免疫组织化学。 ...
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