{{'Search' | translate}}
 

Columns Available with 5µm Particles, 200 x 2.1mm

Company: PolyLC
Catalog#: 202SE05
Bio-protocol()
Company-protocol()
Other protocol()

Protein Isolation from Plasma Membrane, Digestion and Processing for Strong Cation Exchange Fractionation
Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract]  Plasma membrane (PM) proteins play crucial roles in diverse biological processes. But their low abundance, alkalinity and hydrophobicity make their isolation a difficult task. This protocol describes an efficient method for PM proteins isolation, digestion and fractionation so that they can be well prepared for mass spectrometry analysis. [摘要]  血浆膜(PM)蛋白在不同生物过程中起关键作用。但是,他们的低丰度,碱度和疏水性使其隔离成为一项艰巨的任务。该方案描述了PM蛋白分离,消化和分级的有效方法,以便它们可以很好地准备用于质谱分析。

背景 血浆膜(PM)蛋白参与不同的生物学过程,包括信号转导,离子运输和膜运输,是细胞与环境交流中的第一反应者。它们具有从物种,细胞类型和发育阶段变化的复杂组成(Alexandersson等人,2008)。用质谱(MS)全面揭示其组分和表达特征对发育生物学非常重要。然而,它们的疏水性和低丰度对于蛋白质组学分析是一个很大的挑战(Wu和Yates,2003)。通常使用像正常表面活性剂,有机溶剂和尿素这样的添加剂来改善PM蛋白的溶解度,但它们会降低蛋白酶的活性并在MS分析过程中产生离子抑制(Zhang,2015)。 Rapi Gest SF是一种新型酸不稳定的阴离子表面活性剂,其结构和功能上与SDS类似,但不抑制低浓度(0.1%w / v)下的常见内肽酶活性。因此,Rapi 用于增溶PM蛋白的Gest SF不仅可以通过暴露裂解位点促进它们的消化,而且还容易被强酸淬灭并通过离心去除,使表面活性剂不影响MS鉴定(Yu 等人,2003)。通过Rapi Gest ...

Comments