| Isolation, Culture, and Differentiation of Primary Myoblasts Derived from Muscle Satellite Cells
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Author:
Date:
2020-07-20
[Abstract] The skeletal muscle is key for body mobility and motor performance, but aging and diseases often lead to progressive loss of muscle mass due to wasting or degeneration of muscle cells. Muscle satellite cells (MuSCs) represent a population of tissue stem cells residing in the skeletal muscles and are responsible for homeostatic maintenance and regeneration of skeletal muscles. Growth, injury, and degenerative signals activate MuSCs, which then proliferate (proliferating MuSCs are called myoblasts), differentiate and fuse with existing multinuclear muscle cells (myofibers) to mediate muscle growth and repair. Here, we describe a protocol for isolating MuSCs from skeletal muscles of mice for in vitro analysis. In addition, we provide a detailed protocol on how to culture and ...
[摘要] [摘要] 骨骼肌是身体活动和运动表现的关键，但是衰老和疾病通常会由于肌肉细胞的浪费或变性而导致肌肉质量的逐步丧失。肌卫星细胞（MuSCs）代表的组织STE群体米细胞小号居住在骨骼肌和负责骨骼肌的体内平衡维持和再生。生长，损伤和变性信号激活MuSC，然后增殖（增殖的MuSC被称为成肌细胞），分化并与现有的多核肌肉细胞（肌纤维）融合，以介导肌肉的生长和修复。在这里，我们描述了从小鼠骨骼肌中分离MuSC的体外实验方案分析。此外，我们提供了有关如何将原代成肌细胞培养和分化成肌管的详细协议，以及用于表征细胞的免疫荧光染色程序。这些方法对于在体外模拟再生肌生成以了解MuSC 的动力学，功能和分子调控至关重要。
[背景] 通过多种细胞功能维持肌肉的动态平衡，对于保持肌肉的完整性至关重要。组织特异性成体干细胞能够在整个生命中连续不断地再生局部组织。在成年骨骼肌中，称为肌肉卫星细胞（MuSC）的干细胞群具有强大的再生能力，这是肌肉动态平衡的关键（Yin 等人，2013； Dumont 等人，2016）。静态MuSC位于与肌肉纤维并列的基底层下方的壁iche中，负责肌肉的生长和再生（Yin 等人，2013； Dumont 等人，2016）。
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| Muscle Histology Characterization Using H&E Staining and Muscle Fiber Type Classification Using Immunofluorescence Staining
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Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] Muscle function is determined by its structure and fiber type composition. Here we describe a protocol to examine muscle histology and myofiber types using hematoxylin and eosin (H&E) and immunofluorescence staining, respectively. H&E stain nucleus in blue and cytoplasm in red, therefore allowing for morphological analyses, such as myofiber diameter, the presence of degenerated and regenerated myofibers, and adipocytes and fibrotic cells. Muscle fibers in adult skeletal muscles of rodents are classified into 4 subtypes based on the expression of myosin heavy chain proteins: Myh7 (type I fiber), Myh2 (type IIA fiber), Myh1 (type IIX fiber), Myh4 (type IIB fiber). A panel of monoclonal antibodies can be used to specifically label these muscle fiber subtypes. These protocols are commonly ...
[摘要] 肌肉功能由其结构和纤维类型组成决定。 这里我们描述一个协议，分别检查使用苏木精和伊红（H＆E）和免疫荧光染色的肌肉组织学和肌纤维类型。 H＆E在蓝色和细胞质红色染色核，因此允许形态学分析，如肌纤维直径，退化和再生肌纤维的存在，以及脂肪细胞和纤维化细胞。 基于肌球蛋白重链蛋白Myh7（I型纤维），Myh2（IIA型纤维），Myh1（IIX型纤维），Myh4（IIB型纤维）的表达，将啮齿动物成年骨骼肌肌肉纤维分为4种亚型：。 一组单克隆抗体可用于特异性标记这些肌纤维亚型。 这些方案通常用于肌肉发育，生长和再生的研究（例如：Wang等，2015; Nie等，2016; Yue et al。，2016; Wang et al。，2017）。
【背景】骨骼肌由肌细胞，脂肪细胞，成纤维细胞和其他细胞类型组成。 多核心肌细胞，骨骼肌的主要组成，也称为肌纤维（肌纤维）。 肌肉组织学研究是肌肉功能研究的常规方法。 一般来说，肌纤维的直径和脂肪细胞的程度和纤维化面积与肌肉力量有关（Yue et al。，2016）。 此外，中心有核肌纤维的存在作为肌肉再生期间新再生肌纤维的替代指标（Wang等，2017）。 基于差异代谢性状和肌球蛋白重链（MyHC）亚型的表达，肌纤维分为四种类型（I，IIa，IIx和IIb）。 ...
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